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lofty23

禁虫 (正式写手)
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1楼 2011-05-01 10:20:55
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-05-02 12:26:47
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-05-02 00:37:03:
为什么呢？呵呵~我想学习下，请赐教哦~

SDS等去垢剂影响膜和蛋白的结合，抵消掉一部分甲醇固定的作用。
所以小分子量的蛋白尽量不要引入SDS，大分子量的倒是没有太大关系。
反正我就是这么弄得，我用0.44的膜可以做10几kD的蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2011-05-02 10:34:08
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 不错 学习 2011-05-01 14:30:51
西瓜(金币+1, EPI+1): 昨天漏了，补上 2011-05-02 08:41:05
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:28
给你一个转缓的配方
Tris  3.029g
Glycine  14.4g
SDS   0.1g
甲醇200ml
总体积1L
25KD的蛋白，300mA转膜30~40min即可。
另外要注意你所用膜的质量，有时候转不上可能是膜过期了，PVDF膜需要先用甲醇活化后再使用。GOOD  LUCK!
赞一下(4人) 回复此楼
3楼2011-05-01 11:27:28
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lofty23

禁虫 (正式写手)
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4楼2011-05-01 12:07:28
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 都是高手啊 2011-05-01 14:31:10
西瓜: 鼓励交流 2011-05-02 00:37:55
西瓜(金币+1, EPI+1): 2011-05-02 00:38:28
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:24
引用回帖:
Originally posted by lofty23 at 2011-05-01 12:07:28:
谢谢！PVDF膜式可以用的，我们的内参的转上了的！

12%的胶。
PVDF 膜的的孔径是0.22 um。
转移缓冲液的配方：
甘氨酸：2.9g
TRIS:5.8g
SDS:0.37g
甲醇：200ml
定容至1L。
60v转移2h。
祝你成功，我们配方很好用的。
赞一下(4人) 回复此楼
5楼2011-05-01 12:32:45
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