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lofty23

禁虫 (正式写手)
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1楼 2011-05-01 10:20:55
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noah1020

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
lofty23(金币+1): 2011-05-14 07:48:01
西瓜(金币+3): 补上~鼓励！ 2011-05-14 07:50:11
楼主你用的系统貌似和我的一样~我的分子量是30kD，之前我用恒压法转过，貌似有些会转过头~现在一直是200mA转膜1.5h~转膜的时候一定要把槽子里的冰盒加上，还有最好在外面放一盆冰，把槽子放在冰中~这样可以降低转膜过程中产热造成的蛋白降解~ 你转完膜可以试试用丽春红染色，10min，应该可以出现蛋白条带的，然后再洗洗接着blocking和后续孵育抗体就行~
赞一下(2人) 回复此楼
21楼2011-05-13 13:09:48
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 不错 学习 2011-05-01 14:30:51
西瓜(金币+1, EPI+1): 昨天漏了，补上 2011-05-02 08:41:05
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:28
给你一个转缓的配方
Tris  3.029g
Glycine  14.4g
SDS   0.1g
甲醇200ml
总体积1L
25KD的蛋白，300mA转膜30~40min即可。
另外要注意你所用膜的质量，有时候转不上可能是膜过期了，PVDF膜需要先用甲醇活化后再使用。GOOD  LUCK!
赞一下(4人) 回复此楼
3楼2011-05-01 11:27:28
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lofty23

禁虫 (正式写手)
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4楼2011-05-01 12:07:28
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 都是高手啊 2011-05-01 14:31:10
西瓜: 鼓励交流 2011-05-02 00:37:55
西瓜(金币+1, EPI+1): 2011-05-02 00:38:28
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:24
引用回帖:
Originally posted by lofty23 at 2011-05-01 12:07:28:
谢谢！PVDF膜式可以用的，我们的内参的转上了的！

12%的胶。
PVDF 膜的的孔径是0.22 um。
转移缓冲液的配方：
甘氨酸：2.9g
TRIS:5.8g
SDS:0.37g
甲醇：200ml
定容至1L。
60v转移2h。
祝你成功，我们配方很好用的。
赞一下(4人) 回复此楼
5楼2011-05-01 12:32:45
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