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lofty23

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【分子生物】EPI帖 蛋白质生物学实验经验

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★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good,继续加油哦 2011-05-02 11:01:03
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:25:17
12%的胶。
PVDF 膜的的孔径是0.45 um。
转移缓冲液的配方:
Tris  3.029g
Glycine  14.4g
甲醇200ml
定容至1L。
100mA(40V左右)转移1h。
我的蛋白是19KD的,可以做出可重复的结果。
另外,SDS等去垢剂影响膜和蛋白的结合,抵消掉一部分甲醇固定的作用。
13楼2011-05-02 10:31:38
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 不错 学习 2011-05-01 14:30:51
西瓜(金币+1, EPI+1): 昨天漏了,补上 2011-05-02 08:41:05
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:28
给你一个转缓的配方
Tris  3.029g
Glycine  14.4g
SDS   0.1g
甲醇200ml
总体积1L
25KD的蛋白,300mA转膜30~40min即可。
另外要注意你所用膜的质量,有时候转不上可能是膜过期了,PVDF膜需要先用甲醇活化后再使用。GOOD  LUCK!
3楼2011-05-01 11:27:28
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lofty23

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4楼2011-05-01 12:07:28
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★ ★ ★ ★ ★ ★
lofty23(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+4): 都是高手啊 2011-05-01 14:31:10
西瓜: 鼓励交流 2011-05-02 00:37:55
西瓜(金币+1, EPI+1): 2011-05-02 00:38:28
lofty23(金币+1): 2011-05-02 13:26:24
引用回帖:
Originally posted by lofty23 at 2011-05-01 12:07:28:
谢谢!PVDF膜式可以用的,我们的内参的转上了的!

12%的胶。
PVDF 膜的的孔径是0.22 um。
转移缓冲液的配方:
甘氨酸:2.9g
TRIS:5.8g
SDS:0.37g
甲醇:200ml
定容至1L。
60v转移2h。
祝你成功,我们配方很好用的。
5楼2011-05-01 12:32:45
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