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guanjinke

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR 已有5人参与

给位学长:我做的PCR一共有两对引物,一对对两个样品(肌肉和皮张)DNA都能扩出来,一对对皮张提的DNA 做时扩不出来,但对肌肉样品能扩出来。请问这是怎么回事?
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励发帖应助。 2011-04-17 19:14:09
引用回帖:
Originally posted by guanjinke at 2011-04-17 11:11:49:
给位学长:我做的PCR一共有两对引物,一对对两个样品(肌肉和皮张)DNA都能扩出来,一对对皮张提的DNA 做时扩不出来,但对肌肉样品能扩出来。请问这是怎么回事?

能对肌肉组织DNA能P出来的引物
不能对皮张DNA P出来
是这个意思吧
出现这种情况的可能性有几种:
1.在P皮张的时候PCR体系出问题了
可以重复确认一下这个体系的各个环节确实没问题
2.模板DNA是基因组DNA还是cDNA
如果是cDNA的话有可能这个基因不在皮张里表达
所以就没有RNA自然就没有cDNA,自然就P不出来了
3.这对引物可能确实P不出来特异性目的条带
但是在肌肉细胞中,它可以可以和其他基因结合从而P出来非特异性带
这个也很好检测,可以检测一下
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
3楼2011-04-17 17:37:28
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是楼主的肌肉样品DNA有问题!
jiayoubashaonian
2楼2011-04-17 15:10:38
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guanjinke

银虫 (小有名气)

谢谢!是基因组DNA.
3.这对引物可能确实P不出来特异性目的条带
但是在肌肉细胞中,它可以可以和其他基因结合从而P出来非特异性带
这个也很好检测,可以检测一下 .
这个怎么检测啊?
4楼2011-04-17 21:50:06
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by guanjinke at 2011-04-17 21:50:06:
谢谢!是基因组DNA.
3.这对引物可能确实P不出来特异性目的条带
但是在肌肉细胞中,它可以可以和其他基因结合从而P出来非特异性带
这个也很好检测,可以检测一下 .
这个怎 ...

简单
看条带大小对不啦
要是分子量大小也对的话
那就用引物做一下基因组Blast
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
5楼2011-04-18 09:22:35
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