| 查看: 7321 | 回复: 24 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
|
|||
|
我最近做克隆，提取质粒DNA后，直接用以前扩增目的条带的引物来扩增质粒DNA，想看看是否是阳性的克隆，可是怎么也扩增不出来，所以第一个问题是请教各位：是否可以用这样的引物来扩增？我个人感觉理论上是可以的！ 其次是，我的质粒DNA是不是有问题，也会导致这样的情况，那么就想请教质粒DNA是否不需要经过酶切而直接跑电泳检测呢？ 以及如何来检测阳性克隆是做好的方法？谢谢大家 我筛选单菌落是用的IPTG和X-GOL，也就是挑选白色的单菌落后培养提取质粒DNA！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有77人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：为什么PCR可以P出来，但是酶切条带不对呢？
已经有6人回复
- 奇怪的质粒酶切
已经有4人回复
- DNA过夜后电泳跑不出来了
已经有6人回复
- 我跑的质粒DNA琼脂糖电泳的图怎么是这样的，什么原因啊
已经有15人回复
- 提取质粒跑电泳后发现在溴酚蓝上面有一团白色的类似条带的东西，求解！！
已经有10人回复
- pGEM-T质粒酶切时遇到的一些问题
已经有11人回复
- 质粒大小如何检测
已经有21人回复
- 总DNA酶切电泳图
已经有12人回复
- 克隆质粒上的基因需要将质粒酶切成线性吗？
已经有15人回复
- Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事？
已经有7人回复
- 有谁知道关于Pfrt I 质粒的信息，包括他的基因序列和含有的酶切位点。急啊
已经有4人回复
- 大质粒的大小（bp）通常如何检测
已经有5人回复
- 新手求助——质粒电泳条带问题
已经有15人回复
- 质粒单酶切之后比原始质粒变小了！！！？？
已经有7人回复
- 求助：为什么线性化的质粒回收之后电泳结果不是一条带
已经有11人回复
- 我做酶切电泳自制marker开始都挺好，后来跑不开了。
已经有7人回复
- 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？
已经有9人回复
- 质粒是否需要酶切后再电泳？
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
已经有18人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】提质粒后跑的电泳图
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒电泳中的三条带
已经有14人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
东北大学-招收2026年硕士研究生2-3名（金属材料3D打印方向）
+5/160
-
北京理工大学 珠海校区全职院士招数名博士生--申请考核制-半导体、光学、微电子
+2/130
-
中南林业科技大学-自然资源与生态环境管理-申请-考核制博士生招生（导师本人发布）
+1/81
-
深圳大学信息功能聚合物电介质方向“申请-考核制”博士生招生
+1/78
-
上海交通大学变革分子学中心申涛课题组2026秋季入学推荐-考核制博士招生（有机）
+1/77
-
中国科协青年托举（针对32岁青年人才的）是不是不搞了，25年都没有通知
+1/68
-
自驾淄博回四川遂宁过年，寻找小伙伴一起
+1/66
-
中国地质大学（武汉）地质学、地质资源与地质工程、资源与环境方向招生，请尽快联系！
+1/54
-
上海交通大学 碳纳米管、阵列、器件应用博士后招聘
+1/32
-
【教授本人】南佛罗里达大学化学系刘文奇课题组 2026 Fall 招收有机/超分子方向博士生
+1/29
-
求奥希替尼生产工艺
+1/29
-
博士后, 博士招生 美国大纽约地区 NJIT
+1/27
-
华南理工大学宋波教授招收2026年博士生（二氧化碳有机、高分子和光电生物催化还原）
+1/8
-
【博士后/科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/5
-
中国计量大学叶德茂课题组招收博士研究生（欢迎计算机类、电子信息类等专业）
+1/4
-
0854电子信息330求调剂
+1/4
-
自荐：大模型ai辅助论文阅读软件：EasyReader论文易读
+1/3
-
山东师范大学海外优青（校长团队）招聘硕士/博士/博后
+1/2
-
意大利米兰理工大学Lorenza Petrini教授招收玛丽居里MEDALLOY博士
+1/2
-
南方科技大学田雷蕾课题组招收2026年博士生
+1/1
★ ★ ★ ★ ★ ★
wangy0908(金币+20): Thanks for your reply, I will try it! 2011-04-07 20:44:01
dhd997(金币+6, EPI+1): 欢迎继续交流 2011-04-08 08:50:05
wangy0908(金币+20): Thanks for your reply, I will try it! 2011-04-07 20:44:01
dhd997(金币+6, EPI+1): 欢迎继续交流 2011-04-08 08:50:05
|
1.其实最快速的方法是进行菌落PCR，可以省去提质粒这一步，节省时间，当然以质粒为模板来进行PCR验证也是完全没有任何问题的。 2.直接通过跑质粒来检测是否是阳性克隆是不保险的，因为质粒一般会跑出三条带，分别为超螺旋、开环和线性三种状态，如果你的插入片段不是特别大的话是无法区分的，还有一般从不同感受态细胞里提出的同一种质粒带型也是不同的，即使是同一种感受态细胞提出的同一种质粒有时带型也会有些许差异。 3.通过酶切验证是一种比较直观且相对可信的方法，因为有时候因为序列本身比较特殊（如高GC或二级结构比较多）或引物设计不够合理，通过普通PCR方法很难扩出来，用酶切验证就比较方便了。但前提是你要选好合适的酶切位点！单酶切或双酶切均可，不过你要知道切完后会出现几条带，每条带应该多大。 |
14楼2011-04-07 12:48:23
2楼2011-04-06 10:24:21
3楼2011-04-06 10:43:17
1949stone(EPI+1): 学习下 2011-04-06 14:07:00
wangy0908(金币+20): 2011-04-06 20:59:17
wangy0908(金币+20): 2011-04-06 20:59:17
|
用你的引物来鉴定是没有问题的，确实单酶切之后效果会好，但得保证你的酶切位点不在PCR引物中。 个人认为你提取的质粒跑电泳是没有意义的。因为蓝白斑筛选也会有假阳性产生，特别是用pMD-18T载体，比20T的效果好差一些，当然价格上也便宜一些。lz的情况应该是假阳性克隆，最好不要单独根据颜色来筛选，可以采用菌落PCR先初步鉴定，然后摇菌提质粒，得到质粒后可以PCR，最好也单酶切后电泳来鉴定。不酶切直接跑电泳可能出现的情况比较复杂，不好判断。 |
4楼2011-04-06 12:20:36