| 查看: 8471 | 回复: 24 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
|
|||
|
我最近做克隆，提取质粒DNA后，直接用以前扩增目的条带的引物来扩增质粒DNA，想看看是否是阳性的克隆，可是怎么也扩增不出来，所以第一个问题是请教各位：是否可以用这样的引物来扩增？我个人感觉理论上是可以的！ 其次是，我的质粒DNA是不是有问题，也会导致这样的情况，那么就想请教质粒DNA是否不需要经过酶切而直接跑电泳检测呢？ 以及如何来检测阳性克隆是做好的方法？谢谢大家 我筛选单菌落是用的IPTG和X-GOL，也就是挑选白色的单菌落后培养提取质粒DNA！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有227人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：为什么PCR可以P出来，但是酶切条带不对呢？
已经有6人回复
- 奇怪的质粒酶切
已经有4人回复
- DNA过夜后电泳跑不出来了
已经有6人回复
- 我跑的质粒DNA琼脂糖电泳的图怎么是这样的，什么原因啊
已经有15人回复
- 提取质粒跑电泳后发现在溴酚蓝上面有一团白色的类似条带的东西，求解！！
已经有10人回复
- pGEM-T质粒酶切时遇到的一些问题
已经有11人回复
- 质粒大小如何检测
已经有21人回复
- 总DNA酶切电泳图
已经有12人回复
- 克隆质粒上的基因需要将质粒酶切成线性吗？
已经有15人回复
- Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事？
已经有7人回复
- 有谁知道关于Pfrt I 质粒的信息，包括他的基因序列和含有的酶切位点。急啊
已经有4人回复
- 大质粒的大小（bp）通常如何检测
已经有5人回复
- 新手求助——质粒电泳条带问题
已经有15人回复
- 质粒单酶切之后比原始质粒变小了！！！？？
已经有7人回复
- 求助：为什么线性化的质粒回收之后电泳结果不是一条带
已经有11人回复
- 我做酶切电泳自制marker开始都挺好，后来跑不开了。
已经有7人回复
- 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？
已经有9人回复
- 质粒是否需要酶切后再电泳？
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
已经有18人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】提质粒后跑的电泳图
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒电泳中的三条带
已经有14人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
2026年财务管理、经济与信息技术国际会议 (FMEIT 2026)
+1/604
-
今天看到省基金挂了，希望国基面上能中吧
+5/425
-
[求助]请问水下焊接技术有啥进步？
+1/191
-
中国科学院空天院精密干涉测量团队 精密机械结构工程师招聘启事
+1/81
-
北京信息科技大学机电工程学院硕士研究生招生线上宣讲会——8月16日
+1/81
-
中国科学院空天院精密干涉测量团队招聘光学/算法/机械方向博士后/特别研究助理
+1/80
-
中国科学院空天院精密干涉测量团队招聘光学/算法/机械方向博士后/特别研究助理
+1/80
-
广东医科大学博士后招聘-基础医学，生信等方向
+1/38
-
祈福！
+1/24
-
物理学报录用，散币感谢合作者和审稿人
+2/22
-
西北工业大学 生科院 秦绪军课题组诚招博士后、博士/硕士研究生【长期有效】
+1/13
-
27级博士生 + 福州大学 + 经管学院 + 管理科学与工程（见贴则有指标）
+1/8
-
论文祈福
+1/8
-
关于Ghaffar-Parkins催化剂催化氰基水解为酰胺的问题
+1/6
-
西安交通大学杜宝吉课题组招收申请考核制博士生
+2/6
-
27推免-广州医科大学封红亮教授招收精神医学应用心理学推免生
+1/5
-
北理工集成电路杰青团队 | 诚招科助理
+1/5
-
中国科学院生物物理研究所田勇课题组招聘联合培养生
+1/3
-
海南大学化学院-科研助理招聘 （可读博，可与华中科技大学，天津大学联培）+博后招聘
+1/2
-
海南大学化学院—功能分子器件团队2027博士招生+博士后招聘
+1/2
★ ★ ★ ★ ★ ★
wangy0908(金币+20): Thanks for your reply, I will try it! 2011-04-07 20:44:01
dhd997(金币+6, EPI+1): 欢迎继续交流 2011-04-08 08:50:05
wangy0908(金币+20): Thanks for your reply, I will try it! 2011-04-07 20:44:01
dhd997(金币+6, EPI+1): 欢迎继续交流 2011-04-08 08:50:05
|
1.其实最快速的方法是进行菌落PCR，可以省去提质粒这一步，节省时间，当然以质粒为模板来进行PCR验证也是完全没有任何问题的。 2.直接通过跑质粒来检测是否是阳性克隆是不保险的，因为质粒一般会跑出三条带，分别为超螺旋、开环和线性三种状态，如果你的插入片段不是特别大的话是无法区分的，还有一般从不同感受态细胞里提出的同一种质粒带型也是不同的，即使是同一种感受态细胞提出的同一种质粒有时带型也会有些许差异。 3.通过酶切验证是一种比较直观且相对可信的方法，因为有时候因为序列本身比较特殊（如高GC或二级结构比较多）或引物设计不够合理，通过普通PCR方法很难扩出来，用酶切验证就比较方便了。但前提是你要选好合适的酶切位点！单酶切或双酶切均可，不过你要知道切完后会出现几条带，每条带应该多大。 |
14楼2011-04-07 12:48:23
2楼2011-04-06 10:24:21
3楼2011-04-06 10:43:17
1949stone(EPI+1): 学习下 2011-04-06 14:07:00
wangy0908(金币+20): 2011-04-06 20:59:17
wangy0908(金币+20): 2011-04-06 20:59:17
|
用你的引物来鉴定是没有问题的，确实单酶切之后效果会好，但得保证你的酶切位点不在PCR引物中。 个人认为你提取的质粒跑电泳是没有意义的。因为蓝白斑筛选也会有假阳性产生，特别是用pMD-18T载体，比20T的效果好差一些，当然价格上也便宜一些。lz的情况应该是假阳性克隆，最好不要单独根据颜色来筛选，可以采用菌落PCR先初步鉴定，然后摇菌提质粒，得到质粒后可以PCR，最好也单酶切后电泳来鉴定。不酶切直接跑电泳可能出现的情况比较复杂，不好判断。 |
4楼2011-04-06 12:20:36
