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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大质粒的大小（bp）通常如何检测
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sootiey

银虫 (小有名气)

[求助] 大质粒的大小（bp）通常如何检测

刚刚提取了一个新分离纯化的细菌（节杆菌）的质粒，很大，色带超出了10000的marker，目前只是提取了并通过电泳检测到了一个大质粒（大小应该在几万bp以上），但对其特征还一无所知，也无从设计引物，有办法检测这个质粒的大小吗？谢谢！
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1楼 2011-12-24 17:19:30
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+4): Good! 2011-12-26 10:17:02
多用几个限制性内切酶进行完全酶切（分别进行单切），找到带型比较合适的，进行质粒大小的推算
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2楼2011-12-24 20:27:02
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sootiey

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by panda73 at 2011-12-24 20:27:02:
多用几个限制性内切酶进行完全酶切（分别进行单切），找到带型比较合适的，进行质粒大小的推算

非常感谢，我怎么就没有想到
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3楼2011-12-26 09:07:24
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助。不过楼主的质粒太大了，直接跑胶没法比较大小（误差非常大），还是切成小片段再和maker比较更现实。 2011-12-26 10:19:02
如果你想知道精确的大小估计只能跑脉冲电泳。
另外有个平时用来鉴定基因组DNA的marker：Lamda DNA/Hind III marker,有一条23kb的条带，你用0.6%的胶，4-5v/cm电泳上2-3小时也可以稍为看一看。或者你再查查好像有10kb、 20kb的marker的，选个合适的来普通琼脂糖一下应该也可以。
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伟大航线....
4楼2011-12-26 09:36:32
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mjzjily

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，我现在研究的也是节杆菌，据我所知，节杆菌本身应该不带有质粒。你的质粒是哪种，方便透露吗？是自身携带的，还是导入的？谢谢
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扎实科研
5楼2012-07-05 09:58:29
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sootiey

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mjzjily at 2012-07-05 09:58:29
你好，我现在研究的也是节杆菌，据我所知，节杆菌本身应该不带有质粒。你的质粒是哪种，方便透露吗？是自身携带的，还是导入的？谢谢

节杆菌的质粒通常比较大，据我所知，高的可达160kb以上，可以称之为小染色体
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6楼2012-08-01 06:55:54
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