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sootiey

银虫 (小有名气)

[求助] 大质粒的大小(bp)通常如何检测

刚刚提取了一个新分离纯化的细菌(节杆菌)的质粒,很大,色带超出了10000的marker,目前只是提取了并通过电泳检测到了一个大质粒(大小应该在几万bp以上),但对其特征还一无所知,也无从设计引物,有办法检测这个质粒的大小吗?谢谢!
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+4): Good! 2011-12-26 10:17:02
多用几个限制性内切酶进行完全酶切(分别进行单切),找到带型比较合适的,进行质粒大小的推算
2楼2011-12-24 20:27:02
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sootiey

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by panda73 at 2011-12-24 20:27:02:
多用几个限制性内切酶进行完全酶切(分别进行单切),找到带型比较合适的,进行质粒大小的推算

非常感谢,我怎么就没有想到
3楼2011-12-26 09:07:24
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助。不过楼主的质粒太大了,直接跑胶没法比较大小(误差非常大),还是切成小片段再和maker比较更现实。 2011-12-26 10:19:02
如果你想知道精确的大小估计只能跑脉冲电泳。
另外有个平时用来鉴定基因组DNA的marker:Lamda DNA/Hind III marker,有一条23kb的条带,你用0.6%的胶,4-5v/cm电泳上2-3小时也可以稍为看一看。或者你再查查好像有10kb、 20kb的marker的,选个合适的来普通琼脂糖一下应该也可以。
伟大航线....
4楼2011-12-26 09:36:32
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mjzjily

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我现在研究的也是节杆菌,据我所知,节杆菌本身应该不带有质粒。你的质粒是哪种,方便透露吗?是自身携带的,还是导入的?谢谢
扎实科研
5楼2012-07-05 09:58:29
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sootiey

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mjzjily at 2012-07-05 09:58:29
你好,我现在研究的也是节杆菌,据我所知,节杆菌本身应该不带有质粒。你的质粒是哪种,方便透露吗?是自身携带的,还是导入的?谢谢

节杆菌的质粒通常比较大,据我所知,高的可达160kb以上,可以称之为小染色体
6楼2012-08-01 06:55:54
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