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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR--小弟上图了，帮我看看图 已有17人参与


这是我用其他物种唐鱼、鲤鱼的目的基因片段的引物去扩乌贼的这个目的片段，出现了很多条带（还有很多的相关引物正在做，先做的这两条），目的片段是b-actin，应该还算保守吧？
图：上面是唐鱼，下面是鲤鱼
从左至右是45-65度的退火温度梯度
本人觉得是引物特异性不高，因为前面45度时条带很多，到后面的65度又没有条带出现。
高手帮我出出主意，怎么能增加特异性扩增？

[ Last edited by feiye2214 on 2010-12-9 at 21:52 ]
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1楼 2010-12-09 21:27:31
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
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引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-12-09 23:09:11:

1% AGE 0.5×TBE

呵呵，我用0.75的，1×TAE，每次跑出来的都很难看
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小木虫之有关部门负责人
10楼2010-12-09 23:27:16
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
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silicare(金币+1): 2010-12-28 14:04:20
乍一看还以为是筛ssr呢    引物特异性太低，重设计吧
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2楼2010-12-09 22:20:59
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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引物特异性太差，另外可以试试touchdownPCR。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-12-09 22:27:56
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
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引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-12-09 21:27:31:
[img]这是我用其他物种唐鱼、鲤鱼的目的基因片段的引物去扩乌贼的这个目的片段，出现了很多条带（还有很多的相关引物正在做，先做的这两条），目的片段是 ...

很漂亮的说，请问你是什么marker，多大的胶？
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小木虫之有关部门负责人
4楼2010-12-09 22:32:15
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