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kuboy212419772

铜虫 (初入文坛)

[求助] pcr 图片 求助！！！

最近PCR出现这种情况，图中出现的不是需要的目的片段（200bp），maker 右边是基因组，迷惑，求助！

717187_1363012539_271.jpg
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1楼 2013-03-18 22:33:57
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
特别像是二聚体  你的引物设计的怎么样  是不是有dimer
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2楼2013-03-18 22:38:56
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生命

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得最下面那个有点像dimer，是不是引物特异性有问题？你把引物在序列里找一下，看看能不能找着相似的……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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守恒！！！
3楼2013-03-19 00:13:12
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是引物特异性差，先做下退火温度梯度看看。
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4楼2013-03-19 00:34:13
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
的确出现了非特异性扩增，引物特异性差，需重新设计，
同意楼上先做整体的退火温度梯度试验搜寻一下。
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毕业回望科研路，满目疮痍一身土
5楼2013-03-19 06:42:10
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面的不太亮的才是dimer吧，上面较亮的应该是非特异性扩增，楼主应该检查引物特异性。虽然不知道楼主是何种marker，但一般marker最小的片段都较小，据此推断非特异性条带很可能小于100bp。
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6楼2013-03-19 08:44:16
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莹莹陀zws

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物特异性不好，把退火温度提高再试试，不行就重新设计引物或者换。
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悲伤着你的悲伤，幸福着你的幸福
7楼2013-03-19 09:31:12
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kuboy212419772

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by joan198108 at 2013-03-19 08:44:16
下面的不太亮的才是dimer吧，上面较亮的应该是非特异性扩增，楼主应该检查引物特异性。虽然不知道楼主是何种marker，但一般marker最小的片段都较小，据此推断非特异性条带很可能小于100bp。

嗯，是小于100bp，marker：100,250,500的
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8楼2013-03-19 09:52:24
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119904386

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议跑个touchdown，还这样的话，换引物
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9楼2013-03-20 15:56:59
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