应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急!有关PCR中出现的一些问题,大家帮我看看啊!
61/1返回列表
查看: 1134  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wwsw38

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急!有关PCR中出现的一些问题,大家帮我看看啊! 已有5人参与

我在做的是16SRDNA的PCR,细菌鉴定.以下问题不明白,望大家帮我下:
            1.我提取的DNA中有大量的RNA,这对PCR有什么影响吗?如果加RNAse消除RNA,这对PCR会不会有影响?
            2.我P出来的结果含有非特异性杂带,是不是要提高退火温度?
            3.送去公司测序一般要多少微升才够?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
为自己加油
1楼 2010-04-25 22:13:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

434744419

金虫 (小有名气)
建议还是换引物吧 如果引物好的话，退火温度查五度都能P出来
赞一下 回复此楼
2楼2010-04-25 23:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1110rainjob

铜虫 (小有名气)
个人认为有RNA应该不影响你的结果；
存在非特异性条带，你可以提高退火温度，降低模板量试试；
一般测序均是将PCR产物连接到T载，转化到大肠杆菌中，经鉴定后送菌液去测序。
现在也可以直接送PCR产物，但是PCR片段需较小，且除了体积外，对浓度也是有要求的。具体的量你咨询你将送去测序的生物公司代理商即可。
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-26 00:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

308145157

木虫 (著名写手)
最好还是用RNase处理下，少量的RNase对PCR没什么影响，另外，建议不要用PCR产物直接测序，虽然方便但是问题真的很多，最好还是和T载体等连接好了，直接送重组子过去侧序。退火温度自己还是做个梯度比较合适，多试几个温度也不麻烦，不想试的话就做个胶回收吧。
赞一下 回复此楼
心若在，梦就在......
4楼2010-04-26 08:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
提基因组的时，可以在抽提前加点RNase处理一段时间；
可以适当提高引物退火温度，如果不行的话可能就是引物设计问题了；
如果拿pcr片段测序的话量很少，好像才是多少pmol ，不过不能有杂带啊
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-04-26 09:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengwufenzi

金虫 (正式写手)
wwsw38(金币+1): 2010-04-26 14:25
1、你该加入加RNAse消除RNA,RNAse一般对PCR不会有影响，当然，你也可以用广谱蛋白酶再将RNAse除去。
2、产生非特异性杂带，解决要①减少Taq酶的量，或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量，减少引物的用量，减少循环次数，提高退火温度。
3、.送去公司测序一般是先将你得到的片段进行转化，筛选后挑取菌斑交给生物公司。
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-26 09:06:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wwsw38 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 一志愿郑大070303，338分，求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭