24小时热门版块排行榜    

查看: 1527  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wwsw38

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急!有关PCR中出现的一些问题,大家帮我看看啊! 已有5人参与

我在做的是16SRDNA的PCR,细菌鉴定.以下问题不明白,望大家帮我下:
            1.我提取的DNA中有大量的RNA,这对PCR有什么影响吗?如果加RNAse消除RNA,这对PCR会不会有影响?
            2.我P出来的结果含有非特异性杂带,是不是要提高退火温度?
            3.送去公司测序一般要多少微升才够?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

为自己加油
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengwufenzi

金虫 (正式写手)

wwsw38(金币+1): 2010-04-26 14:25
1、你该加入加RNAse消除RNA,RNAse一般对PCR不会有影响,当然,你也可以用广谱蛋白酶再将RNAse除去。
2、产生非特异性杂带,解决要①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。
3、.送去公司测序一般是先将你得到的片段进行转化,筛选后挑取菌斑交给生物公司。
6楼2010-04-26 09:06:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

434744419

金虫 (小有名气)

建议还是换引物吧 如果引物好的话,退火温度查五度都能P出来
2楼2010-04-25 23:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1110rainjob

铜虫 (小有名气)

个人认为有RNA应该不影响你的结果;
存在非特异性条带,你可以提高退火温度,降低模板量试试;
一般测序均是将PCR产物连接到T载,转化到大肠杆菌中,经鉴定后送菌液去测序。
现在也可以直接送PCR产物,但是PCR片段需较小,且除了体积外,对浓度也是有要求的。具体的量你咨询你将送去测序的生物公司代理商即可。
3楼2010-04-26 00:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

308145157

木虫 (著名写手)

最好还是用RNase处理下,少量的RNase对PCR没什么影响,另外,建议不要用PCR产物直接测序,虽然方便但是问题真的很多,最好还是和T载体等连接好了,直接送重组子过去侧序。退火温度自己还是做个梯度比较合适,多试几个温度也不麻烦,不想试的话就做个胶回收吧。
心若在,梦就在......
4楼2010-04-26 08:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 8/400 2026-08-17 17:26 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +34 医学老男孩 2026-08-13 81/4050 2026-08-17 16:20 by yudaoqian88
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见