24小时热门版块排行榜    

查看: 1145  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wwsw38

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】急!有关PCR中出现的一些问题,大家帮我看看啊! 已有5人参与

我在做的是16SRDNA的PCR,细菌鉴定.以下问题不明白,望大家帮我下:
            1.我提取的DNA中有大量的RNA,这对PCR有什么影响吗?如果加RNAse消除RNA,这对PCR会不会有影响?
            2.我P出来的结果含有非特异性杂带,是不是要提高退火温度?
            3.送去公司测序一般要多少微升才够?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

为自己加油
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

308145157

木虫 (著名写手)

最好还是用RNase处理下,少量的RNase对PCR没什么影响,另外,建议不要用PCR产物直接测序,虽然方便但是问题真的很多,最好还是和T载体等连接好了,直接送重组子过去侧序。退火温度自己还是做个梯度比较合适,多试几个温度也不麻烦,不想试的话就做个胶回收吧。
心若在,梦就在......
4楼2010-04-26 08:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

434744419

金虫 (小有名气)

建议还是换引物吧 如果引物好的话,退火温度查五度都能P出来
2楼2010-04-25 23:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1110rainjob

铜虫 (小有名气)

个人认为有RNA应该不影响你的结果;
存在非特异性条带,你可以提高退火温度,降低模板量试试;
一般测序均是将PCR产物连接到T载,转化到大肠杆菌中,经鉴定后送菌液去测序。
现在也可以直接送PCR产物,但是PCR片段需较小,且除了体积外,对浓度也是有要求的。具体的量你咨询你将送去测序的生物公司代理商即可。
3楼2010-04-26 00:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

提基因组的时,可以在抽提前加点RNase处理一段时间;
可以适当提高引物退火温度,如果不行的话可能就是引物设计问题了;
如果拿pcr片段测序的话量很少,好像才是多少pmol ,不过不能有杂带啊
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-04-26 09:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 281求调剂(0805) +9 烟汐忆海 2026-03-16 19/950 2026-03-19 11:42 by laoshidan
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 mxcz321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
请填处理意见