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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 【求助/交流】PCR--小弟上图了，帮我看看图
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR--小弟上图了，帮我看看图 已有17人参与


这是我用其他物种唐鱼、鲤鱼的目的基因片段的引物去扩乌贼的这个目的片段，出现了很多条带（还有很多的相关引物正在做，先做的这两条），目的片段是b-actin，应该还算保守吧？
图：上面是唐鱼，下面是鲤鱼
从左至右是45-65度的退火温度梯度
本人觉得是引物特异性不高，因为前面45度时条带很多，到后面的65度又没有条带出现。
高手帮我出出主意，怎么能增加特异性扩增？

[ Last edited by feiye2214 on 2010-12-9 at 21:52 ]
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1楼 2010-12-09 21:27:31
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scelab

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Originally posted by feiye2214 at 2010-12-09 21:27:31:
[img]这是我用其他物种唐鱼、鲤鱼的目的基因片段的引物去扩乌贼的这个目的片段，出现了很多条带（还有很多的相关引物正在做，先做的这两条），目的片段是 ...

很漂亮的说，请问你是什么marker，多大的胶？
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4楼2010-12-09 22:32:15
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Originally posted by feiye2214 at 2010-12-09 22:52:46:

胶是10cm左右长宽，M是宝生物的100-6000 wide range Marker
给我点建议哈？

胶浓度时多少
pcr偶做的少，帮不上忙~~~
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7楼2010-12-09 23:06:57
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Originally posted by feiye2214 at 2010-12-09 23:09:11:

1% AGE 0.5×TBE

呵呵，我用0.75的，1×TAE，每次跑出来的都很难看
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10楼2010-12-09 23:27:16
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scelab

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Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-09 23:34:03:



估计是你太心急了，电压放的比较大，试试调低点电压，跑久一点。

下次试试啊
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12楼2010-12-09 23:37:09
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