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【求助/交流】PCR求助，做不出来找不到原因 已有4人参与
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做了两个多周的PCR了，非常郁闷。是以霉菌基因组为模板做PCR的。共设计了四对引物，PCR三个基因。（其中有一对引物是PCR基因加上它上下游的）。发现都没有目的带。 1，模板质量应该没问题，跑过电泳，电泳大小在12K左右；OD600：OD800=1.81 2，引物设计，用Primer Premier设计的，有三组引物得分很高，与模板配对的引物长度为17~~20bp 3，PCR酶，DNTP，buffer没问题。用其他模板引物做过阳性对照，所以PCR得不到目的片段肯定是模板或引物的问题。 PCR产物杂带很多，曾经对大小差不多的条带回收酶切验证，仍然得不到目的基因。是不是还是引物的问题？我应该如何设计下一阶段的实验方案？ 谢谢！ |
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