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ltakashi

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在线等,急!!帮我分析下,连接产物跑胶后有三条!! 已有6人参与

我的目的片段1800左右,连的PMD-18T载体
我的连接产物在16度下跑了12个小时后,
跑了胶,
却发现有三条带,
而且都比5000大,

这种现象正常吗?我的目的片段连上了吗????

在线等,急!
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ltakashi

银虫 (小有名气)

怎么没人啊!!!
2楼2010-07-26 20:50:12
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花花贝

金虫 (知名作家)

比照marker
3楼2010-07-26 20:57:02
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个因为片段比较大,所以很难判断是否连接上了,一般质粒会有环状、超螺旋、线性三种状态,再加上连上的目的片段,所以跑出多条带的情况是很正常的。就目前的情况看,很难判断是否连接上了,转化、克隆后做菌落PCR检测吧,提取质粒酶切检测结果会更可信
4楼2010-07-26 21:03:54
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ltakashi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-26 21:03:54:
这个因为片段比较大,所以很难判断是否连接上了,一般质粒会有环状、超螺旋、线性三种状态,再加上连上的目的片段,所以跑出多条带的情况是很正常的。就目前的情况看,很难判断是否连接上了,转化、克隆后做菌落P ...

哦!谢谢!
5楼2010-07-26 21:18:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主情况不明,目的片段和载体是否每一头都用不同的酶切?酶切载体和目的片段后是否检验酶切质量或者回收?是否脱磷酸化?连接摩尔比怎样?情况不同很不好讲。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2010-07-27 04:09:16
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louli

铜虫 (小有名气)

是连接完提的质粒一般就是3条,但距离不会很大
7楼2010-07-27 08:54:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接产物从来没跑过胶,因为没什么意义。
Thank-you,so-blue.
8楼2010-07-27 10:12:41
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