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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】连接后,跑胶没有带!?何解? 已有18人参与

连接前鉴定过待连接的片段,没问题(试剂盒连接)
连接16度、45min,跑胶后居然没有带!!
个人觉得:没有连接成功的片段,不是应该也会跑出带吗?怎么会消失呢,降解了??
求高人解释

[ Last edited by feiye2214 on 2010-8-14 at 20:29 ]
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feiye2214

木虫 (正式写手)

大伙帮帮忙

在线等啊
2楼2010-08-14 20:11:30
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ben1147

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的片段在整个连接体系中只占很小的体积吧,相当于是把片段稀释了,而且电泳的时候也只取了一部分,不一定还能看出来的
3楼2010-08-14 22:08:24
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接的时间有点短吧?
4楼2010-08-14 22:14:49
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★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking:严禁纯表情发帖交流。 2010-08-14 22:24:30
5楼2010-08-14 22:22:02
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
第一:连接时间过短;
第二:连接效率不可能达到100%;
第三:就算连接效率很高,你也只取了小部分跑电泳!
6楼2010-08-15 08:23:33
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yuanzi0501

新虫 (初入文坛)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接时间短吧...
7楼2010-08-15 19:06:31
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怎么都行

银虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
2楼说的对,你把连接的片段稀释了,另外,16度连接一般都是要过夜的,45min的快速连接一般用的温度都是25度左右
8楼2010-08-15 19:54:54
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sweetbobo

银虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做连接每一步至少要留一半作为下一步分析,你那个没带有很多原因:
一,可能降解,但很少出现这样的问题
二,被稀释了,所以看不出,你要查看下自己的连接体系浓度
三,可能dna没有染色上,紫外下看不出,所以要染得时间长些
四,要是连接好的话,会有很多连接梯度条带,所以完美连接时会使得目的条带消失
我建议,以后问题时,要写清楚点,
我想你应该是新手,做生物试验第一次不成功,有可能是你操作的问题
重复几遍就行,不要急躁,别把试剂加错了
9楼2010-08-15 20:55:07
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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 怎么都行 at 2010-08-15 19:54:54:
2楼说的对,你把连接的片段稀释了,另外,16度连接一般都是要过夜的,45min的快速连接一般用的温度都是25度左右

试剂盒上说的是16度30min
10楼2010-08-16 00:10:48
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