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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接后，跑胶没有带！？何解？
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】连接后，跑胶没有带！？何解？ 已有18人参与

连接前鉴定过待连接的片段，没问题（试剂盒连接）
连接16度、45min，跑胶后居然没有带！！
个人觉得：没有连接成功的片段，不是应该也会跑出带吗？怎么会消失呢，降解了？？
求高人解释

[ Last edited by feiye2214 on 2010-8-14 at 20:29 ]
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1楼 2010-08-14 20:03:16
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feiye2214

木虫 (正式写手)

大伙帮帮忙

在线等啊
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2楼2010-08-14 20:11:30
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的片段在整个连接体系中只占很小的体积吧，相当于是把片段稀释了，而且电泳的时候也只取了一部分，不一定还能看出来的
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3楼2010-08-14 22:08:24
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连接的时间有点短吧？
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4楼2010-08-14 22:14:49
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小文7
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking:严禁纯表情发帖交流。 2010-08-14 22:24:30
5楼2010-08-14 22:22:02
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一：连接时间过短；
第二：连接效率不可能达到100%；
第三：就算连接效率很高，你也只取了小部分跑电泳！
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6楼2010-08-15 08:23:33
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yuanzi0501

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连接时间短吧...
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7楼2010-08-15 19:06:31
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
2楼说的对，你把连接的片段稀释了，另外，16度连接一般都是要过夜的，45min的快速连接一般用的温度都是25度左右
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8楼2010-08-15 19:54:54
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sweetbobo

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做连接每一步至少要留一半作为下一步分析，你那个没带有很多原因：
一，可能降解，但很少出现这样的问题
二，被稀释了，所以看不出，你要查看下自己的连接体系浓度
三，可能dna没有染色上，紫外下看不出，所以要染得时间长些
四，要是连接好的话，会有很多连接梯度条带，所以完美连接时会使得目的条带消失
我建议，以后问题时，要写清楚点，
我想你应该是新手，做生物试验第一次不成功，有可能是你操作的问题
重复几遍就行，不要急躁，别把试剂加错了
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9楼2010-08-15 20:55:07
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feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 怎么都行 at 2010-08-15 19:54:54:
2楼说的对，你把连接的片段稀释了，另外，16度连接一般都是要过夜的，45min的快速连接一般用的温度都是25度左右

试剂盒上说的是16度30min
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10楼2010-08-16 00:10:48
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