| 查看: 4017 | 回复: 11 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
[求助]
谁帮我算一下连接体系啊？？能教我一下吗？？
|
|||||
谢谢大家~~ market：DL2000。目的片段：1331bp。载体：2692bp |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 | 实验求助 | 实验交流 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有122人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 麻烦大家帮我看一下，想用软件预测2015年的垃圾组成，应该怎么做
已经有5人回复
- 大家帮我分析一下这样算不算一稿多投
已经有19人回复
- 这算不算学术论文一稿多投（各位大侠帮帮忙分析一下，金币很少，帮帮忙啊）
已经有8人回复
- 大家帮忙看一下，ADF计算带有未成对电子体系的能量分解分析
已经有3人回复
- SSH试验中接头连接不上，着急，请做过的高手帮忙解决一下，万分感激！
已经有4人回复
- castep总是运算出错，哪位高手能帮忙解决一下呢？？
已经有9人回复
- （BiFeO3）GGA和LDA算出来的V0都比实验值小约10~20个立方埃？请各位高手帮我检查一下
已经有27人回复
- 请计算过加静水压下体系的性质的高手帮忙看看-----加压下的压电系数
已经有10人回复
- 【原创】测试了一下，大概得出castep计算所需内存量与计算体系的关系！与大家共享！
已经有32人回复
- 【求助】求高人给分析一下三方相的xrd，帮我算算晶胞参数啊,自己不在行这个啊，赞助50
已经有8人回复
- 帮我看一下这样算不算一稿多投啊！
已经有17人回复
- 硕博连读读完硕士就回国算违约吗，希望xdjm帮助解答一下
已经有37人回复
超然渡陈
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 4
- 应助: 50 (小学生)
- 金币: 1174.9
- 帖子: 127
- 在线: 41.7小时
- 虫号: 1110016
- 注册: 2010-09-28
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蓝色大大: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-04-09 10:54:02
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！我们做的时候一般载体和片段浓度都很高，很少不加水的。 2012-04-11 22:11:37
感谢参与，应助指数 +1
蓝色大大: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-04-09 10:54:02
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！我们做的时候一般载体和片段浓度都很高，很少不加水的。 2012-04-11 22:11:37
|
连接体系是根据载体大小，目的片段大小，以及载体和目的片段的浓度确定的。有一个公式，[(ng of vector×Kb size of insert) ÷ Kb size of vector ]×(insert : vector) = ng of insert。 需要注意的有几点，第一点是一般来说载体与片段比例在3/1--10/1之间， 载体和片段长度相差不大就用5/1,相差大就用8/1。但是并没有一个严格标准可以界定具体什么叫差别大什么叫差别不大，所以一次可以做两个体系，分别用两个不同的比例。 第二点要注意的是，片段和载体用量不要太少，否则连接效率会非常低一般是确定载体的量来算需要插入目的片段的量，载体的量在250 ng以上比较好，一两百也能用，但是太低就不行了。 第三点是连接体系最好不要加水，体系不够的话说的是可以用水补平，但是加水相当于人为稀释了，这样必然会降低连接效率。不够的体系可以稍微调整载体和目的片段的量。这样二者比例就不一定是严格的8/1,或者6/1这种严格的整数，但是没关系。 第四点是连接产物很宝贵的时候，转化时可以转化连接产物的一半，留一半备用。万一这次感受态做的不好不至于全军覆没还得从头来过。有备用连接产物就省事多了。只转化一半会导致阳性克隆减少，但是那么多克隆咱不是也只需要一个阳性的就行了吗。 |
6楼2012-04-09 09:44:13
2楼2012-04-08 19:03:01
3楼2012-04-08 19:10:52
果子么么茶
木虫 (著名写手)
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 1722.5
- 散金: 1639
- 红花: 9
- 沙发: 1
- 帖子: 1313
- 在线: 373.5小时
- 虫号: 1430753
- 注册: 2011-10-07
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2012-04-08 20:24:50
gongeleven
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 55 (初中生)
- 金币: 7107.8
- 散金: 222
- 红花: 3
- 帖子: 432
- 在线: 152.9小时
- 虫号: 1082982
- 注册: 2010-08-27
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2012-04-09 09:32:01
zy_696969
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1138.5
- 红花: 1
- 帖子: 94
- 在线: 115小时
- 虫号: 1485633
- 注册: 2011-11-10
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
★ ★ ★ ★
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 金币+4, 鼓励应助！目的基因和载体算出个比例就好啦，不必引入单位来计算滴 2012-04-11 22:14:25
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 金币+4, 鼓励应助！目的基因和载体算出个比例就好啦，不必引入单位来计算滴 2012-04-11 22:14:25
|
我们一般是这么做的： 1 先把目的基因和载体以同样的量上样跑胶（比如说都是3微升上样） 2 估算目的基因和载体的亮度比"X" 3 公式计算 回收的PCR产物片段（即目的基因）：回收的载体片段=10:1 目的基因：0.3×10^(-3)(pmol)×660×1331bp=263.538ng 载体：0.03×10^(-3)(pmol)×660×2692bp=53.3016ng 目的基因：载体=(263.538/53.3016)/(目的基因和载体的亮度比"X" )  4 确定连接体系 我们用的是T4连接体系 10微升，其中确定的是： ①10× T4 Buffer 1微升 ②T4 DNA Ligase 0.4微升 ③目的基因和④载体按比例加入这个体系，如果不满10微升加⑤ddH2O加满即可。 [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-11 at 22:12 ] |
7楼2012-04-09 15:08:38
8楼2012-04-10 00:36:55
xiangyunch
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1161.8
- 帖子: 134
- 在线: 30.9小时
- 虫号: 1038592
- 注册: 2010-06-09
- 性别: GG
- 专业: 细胞生物学
9楼2012-04-11 01:40:53
紫菱Kitty
金虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1522.1
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 217
- 在线: 55.3小时
- 虫号: 1375254
- 注册: 2011-08-21
- 性别: MM
- 专业: 生物技术药物
10楼2012-04-11 20:12:10
100