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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁帮我算一下连接体系啊？？能教我一下吗？？
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蓝色大大

铁虫 (初入文坛)

[求助] 谁帮我算一下连接体系啊？？能教我一下吗？？

谢谢大家~~

market：DL2000。目的片段：1331bp。载体：2692bp
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1楼 2012-04-08 19:00:06
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zy_696969

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 金币+4, 鼓励应助！目的基因和载体算出个比例就好啦，不必引入单位来计算滴 2012-04-11 22:14:25
我们一般是这么做的：
1 先把目的基因和载体以同样的量上样跑胶（比如说都是3微升上样）
2 估算目的基因和载体的亮度比"X"
3 公式计算
回收的PCR产物片段（即目的基因）：回收的载体片段=10:1
目的基因：0.3×10^(-3)(pmol)×660×1331bp=263.538ng
载体：0.03×10^(-3)(pmol)×660×2692bp=53.3016ng
目的基因：载体=(263.538/53.3016)/(目的基因和载体的亮度比"X" )
4 确定连接体系
我们用的是T4连接体系 10微升，其中确定的是：
①10× T4 Buffer      1微升
②T4 DNA Ligase     0.4微升      
③目的基因和④载体按比例加入这个体系，如果不满10微升加⑤ddH2O加满即可。

[ Last edited by 西瓜 on 2012-4-11 at 22:12 ]
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7楼2012-04-09 15:08:38
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蓝色大大

铁虫 (初入文坛)
第一次求助发帖，大家多多帮忙啊
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2楼2012-04-08 19:03:01
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蓝色大大

铁虫 (初入文坛)
大神捏？？？？？？？？？？？？？
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3楼2012-04-08 19:10:52
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果子么么茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好目的片段和酶切后的载体一起跑下胶以确定浓度 再考虑连接比例
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4楼2012-04-08 20:24:50
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