24小时热门版块排行榜    

查看: 4498  |  回复: 11
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蓝色大大: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-04-09 10:54:02
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good!我们做的时候一般载体和片段浓度都很高,很少不加水的。 2012-04-11 22:11:37
连接体系是根据载体大小,目的片段大小,以及载体和目的片段的浓度确定的。有一个公式,[(ng of vector×Kb size of insert) ÷ Kb size of vector   ]×(insert : vector) = ng of insert。
需要注意的有几点,第一点是一般来说载体与片段比例在3/1--10/1之间, 载体和片段长度相差不大就用5/1,相差大就用8/1。但是并没有一个严格标准可以界定具体什么叫差别大什么叫差别不大,所以一次可以做两个体系,分别用两个不同的比例。
第二点要注意的是,片段和载体用量不要太少,否则连接效率会非常低一般是确定载体的量来算需要插入目的片段的量,载体的量在250 ng以上比较好,一两百也能用,但是太低就不行了。
第三点是连接体系最好不要加水,体系不够的话说的是可以用水补平,但是加水相当于人为稀释了,这样必然会降低连接效率。不够的体系可以稍微调整载体和目的片段的量。这样二者比例就不一定是严格的8/1,或者6/1这种严格的整数,但是没关系。
第四点是连接产物很宝贵的时候,转化时可以转化连接产物的一半,留一半备用。万一这次感受态做的不好不至于全军覆没还得从头来过。有备用连接产物就省事多了。只转化一半会导致阳性克隆减少,但是那么多克隆咱不是也只需要一个阳性的就行了吗。
6楼2012-04-09 09:44:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

相关版块跳转 我要订阅楼主 蓝色大大 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +6 zju2000 2026-08-16 6/300 2026-08-17 10:01 by xter9665
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
信息提示
请填处理意见