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蓝色大大

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2
帖子: 18
在线: 6.5小时
虫号: 1396526
注册: 2011-09-09

[求助] 谁帮我算一下连接体系啊？？能教我一下吗？？

谢谢大家~~

market：DL2000。目的片段：1331bp。载体：2692bp

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1楼 2012-04-08 19:00:06

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超然渡陈

金虫 (小有名气)

MolEPI: 4
应助: 50 (小学生)
金币: 1174.9
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虫号: 1110016
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性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蓝色大大: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-04-09 10:54:02
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！我们做的时候一般载体和片段浓度都很高，很少不加水的。 2012-04-11 22:11:37

连接体系是根据载体大小，目的片段大小，以及载体和目的片段的浓度确定的。有一个公式，[(ng of vector×Kb size of insert) ÷ Kb size of vector ]×(insert : vector) = ng of insert。
需要注意的有几点，第一点是一般来说载体与片段比例在3/1--10/1之间，载体和片段长度相差不大就用5/1,相差大就用8/1。但是并没有一个严格标准可以界定具体什么叫差别大什么叫差别不大，所以一次可以做两个体系，分别用两个不同的比例。
第二点要注意的是，片段和载体用量不要太少，否则连接效率会非常低一般是确定载体的量来算需要插入目的片段的量，载体的量在250 ng以上比较好，一两百也能用，但是太低就不行了。
第三点是连接体系最好不要加水，体系不够的话说的是可以用水补平，但是加水相当于人为稀释了，这样必然会降低连接效率。不够的体系可以稍微调整载体和目的片段的量。这样二者比例就不一定是严格的8/1,或者6/1这种严格的整数，但是没关系。
第四点是连接产物很宝贵的时候，转化时可以转化连接产物的一半，留一半备用。万一这次感受态做的不好不至于全军覆没还得从头来过。有备用连接产物就省事多了。只转化一半会导致阳性克隆减少，但是那么多克隆咱不是也只需要一个阳性的就行了吗。