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谁帮我算一下连接体系啊？？能教我一下吗？？
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zy_696969
金虫 (小有名气)
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- 专业: 生物化学
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西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 金币+4, 鼓励应助！目的基因和载体算出个比例就好啦，不必引入单位来计算滴 2012-04-11 22:14:25
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 编辑内容 2012-04-11 22:12
西瓜: 金币+4, 鼓励应助！目的基因和载体算出个比例就好啦，不必引入单位来计算滴 2012-04-11 22:14:25
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我们一般是这么做的： 1 先把目的基因和载体以同样的量上样跑胶（比如说都是3微升上样） 2 估算目的基因和载体的亮度比"X" 3 公式计算 回收的PCR产物片段（即目的基因）：回收的载体片段=10:1 目的基因：0.3×10^(-3)(pmol)×660×1331bp=263.538ng 载体：0.03×10^(-3)(pmol)×660×2692bp=53.3016ng 目的基因：载体=(263.538/53.3016)/(目的基因和载体的亮度比"X" )  4 确定连接体系 我们用的是T4连接体系 10微升，其中确定的是： ①10× T4 Buffer 1微升 ②T4 DNA Ligase 0.4微升 ③目的基因和④载体按比例加入这个体系，如果不满10微升加⑤ddH2O加满即可。 [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-11 at 22:12 ] |
7楼2012-04-09 15:08:38