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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】在线等，急！！帮我分析下，连接产物跑胶后有三条！！
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ltakashi

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】在线等，急！！帮我分析下，连接产物跑胶后有三条！！ 已有6人参与

我的目的片段1800左右，连的PMD-18T载体
我的连接产物在16度下跑了12个小时后，
跑了胶，
却发现有三条带，
而且都比5000大，

这种现象正常吗？我的目的片段连上了吗？？？？

在线等，急！
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1楼 2010-07-26 20:28:45
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个因为片段比较大，所以很难判断是否连接上了，一般质粒会有环状、超螺旋、线性三种状态，再加上连上的目的片段，所以跑出多条带的情况是很正常的。就目前的情况看，很难判断是否连接上了，转化、克隆后做菌落PCR检测吧，提取质粒酶切检测结果会更可信
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4楼2010-07-26 21:03:54
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ltakashi

银虫 (小有名气)
怎么没人啊！！！
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2楼2010-07-26 20:50:12
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ltakashi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-26 21:03:54:
这个因为片段比较大，所以很难判断是否连接上了，一般质粒会有环状、超螺旋、线性三种状态，再加上连上的目的片段，所以跑出多条带的情况是很正常的。就目前的情况看，很难判断是否连接上了，转化、克隆后做菌落P ...

哦！谢谢！
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5楼2010-07-26 21:18:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主情况不明，目的片段和载体是否每一头都用不同的酶切？酶切载体和目的片段后是否检验酶切质量或者回收？是否脱磷酸化？连接摩尔比怎样？情况不同很不好讲。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2010-07-27 04:09:16
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