应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR遇挫！求解决之道！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
141/2返回列表12下一页
查看: 835  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

feiye2214

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[交流] 【求助/交流】PCR遇挫！求解决之道！ 已有9人参与

小弟想扩增一段已知序列，
5’tttgatgaaaatcgctt......aggcct...tcaaaaacact......tctcttttacagttcagcc3’.....1609bp
                                                                       3’agaaaatgtcaagtcgg5’
现在我就把上下游的17个序列作为引物序列，并加上限制酶切位点序列设计引物为：
Pf：5’GGCGAATTCGtttgatgaaaatcgctt3’
Pr：5’ ATTGGATCCggctgaactgtaaaaga3’
去扩增该序列时，跑胶看到四条明显的条带，1000-1500bp有两条，750bp之下还有两条，我要的片段是1609bp的，我该如何获得目的片段？

是否把每条带都切下来送去测序哦？
还是调整引物和PCR条件再次实验？能不能在再延长引物序列以增加特异性，本来有27个了，听说最长可以达到35bp？是否可行？
时间紧迫，跪求答案！
这段片段是想做克隆的。

[ Last edited by feiye2214 on 2010-7-23 at 17:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-23 16:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

兑换贵宾

小木虫职业打酱油滴~~！

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-07-23 18:16:40
我认为你可以把1000-1500的两条带切下来，纯化，做克隆试试啊……这是最省时间 的，还有，把你设计的引物放入NCBI，BLAST一下，看看是不是你对应的物种的相应序列
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-07-23 16:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
还是应该引物有点不太合适，重新设计两条引物吧
赞一下 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
3楼2010-07-23 17:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-23 17:40:17:
还是应该引物有点不太合适，重新设计两条引物吧

我的引物已经是27bp了，能不能再延长一点以增加特异性啊？？
赞一下 回复此楼
4楼2010-07-23 17:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

主管区长

小木虫职业打酱油滴~~！

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
27bp已经蛮长了啊，要不试试梯度PCR，摸摸条件？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-07-23 18:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2010-07-23 18:18:32:
27bp已经蛮长了啊，要不试试梯度PCR，摸摸条件？

我一开始就做的梯度，退火温度和镁离子，45度的退火温度是不是太低？
但是在45度才有条带，我做到了65度，其他温度范围没有条带
赞一下 回复此楼
6楼2010-07-23 19:35:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

兑换贵宾

小木虫职业打酱油滴~~！

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有带的话，切胶克隆也蛮容易的啊，就两条带切嘛，要不也许还要重新设计引物之类的，时间更久呢
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-07-23 19:45:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lgslgwlgs

兑换贵宾
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking:严禁纯表情发帖。 2010-07-23 22:15:44
8楼2010-07-23 19:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物的问题 特异性不强  换一个引物吧
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-07-23 19:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lgslgwlgs

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
我也想知道
回复此楼
10楼2010-07-23 19:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 feiye2214 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +8 李芷新1 2026-03-31 8/400 2026-04-01 01:39 by 1018329917
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 一志愿华东理工大学，080500学硕，317分，求调剂 +9 s1145 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:47 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +8 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 8/400 2026-03-31 18:23 by lizhi8172
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-30 11/550 2026-03-31 17:33 by AZMK
[考研] 286分调剂 +11 Faune 2026-03-30 13/650 2026-03-31 17:28 by michael2011
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 10/500 2026-03-31 17:14 by zhyzzh
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-30 11/550 2026-03-31 16:34 by 邱gl
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突， 2026-03-31 5/250 2026-03-31 11:29 by 北风之神.
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-03-29 6/300 2026-03-31 10:03 by 氯化亚硝酰
[考研] 085600材料与化工调剂 +16 kikiki7 2026-03-30 16/800 2026-03-31 10:03 by 氯化亚硝酰
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-30 5/250 2026-03-31 09:41 by zhshch
[考研] 085601材料工程找调剂 +17 oatmealR 2026-03-29 18/900 2026-03-30 19:21 by Wang200018
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
[考研] 105500药学求调剂，一志愿山东大学药学，348分 +3 gr哈哈哈 2026-03-28 3/150 2026-03-30 18:56 by 源_2020
[考研] 297求调剂 +17 田洪有 2026-03-26 18/900 2026-03-30 18:32 by nothing投稿中
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +10 y7czhao 2026-03-26 10/500 2026-03-28 14:23 by 唐沐儿
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭