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canon-ph

铜虫 (小有名气)
重新设计引物 就算短点也好 扩出特异得片断看看
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11楼2010-07-27 11:26:51
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fppzcz

铜虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-07-23 16:17:56:
小弟想扩增一段已知序列，
5’tttgatgaaaatcgctt......aggcct...tcaaaaacact......tctcttttacagttcagcc3’.....1609bp
                                                                       3’agaaaatgtc ...

个人经验认为，引物太短，可以设计长度为30bp左右，退火温度60度。
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12楼2010-07-27 11:45:32
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火温度不要45度那么低，还有就是引物特异性不好，已知序列应该不大难扩增，是不是你的引物设计得不好
你慢慢来吧，先把长度缩小到编码区扩增，或者缩小长度扩增一步一步来，有些就是不好扩增
也不要一来就上没切位点，先扩出来再上，而且没切位点要有保护碱基
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13楼2010-07-27 15:49:26
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zhouhuaxi

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我建议放弃任何条带的回收测序，重新设计引物，45的温度杂带一定很多，最好用软件设计，然后NCBI blast的一下。
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14楼2010-07-27 16:00:10
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