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canon-ph

铜虫 (小有名气)

重新设计引物 就算短点也好 扩出特异得片断看看
11楼2010-07-27 11:26:51
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fppzcz

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-07-23 16:17:56:
小弟想扩增一段已知序列,
5’tttgatgaaaatcgctt......aggcct...tcaaaaacact......tctcttttacagttcagcc3’.....1609bp
                                                                       3’agaaaatgtc ...

个人经验认为,引物太短,可以设计长度为30bp左右,退火温度60度。
12楼2010-07-27 11:45:32
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
退火温度不要45度那么低,还有就是引物特异性不好,已知序列应该不大难扩增,是不是你的引物设计得不好
你慢慢来吧,先把长度缩小到编码区扩增,或者缩小长度扩增一步一步来,有些就是不好扩增
也不要一来就上没切位点,先扩出来再上,而且没切位点要有保护碱基
13楼2010-07-27 15:49:26
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zhouhuaxi

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我建议放弃任何条带的回收测序,重新设计引物,45的温度杂带一定很多,最好用软件设计,然后NCBI blast的一下。
14楼2010-07-27 16:00:10
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