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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化后，提质粒无法得到目的基因
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骚人追月

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】转化后，提质粒无法得到目的基因 已有4人参与

本人扩一个基因，回收后连接转化进pMD18-T，然后再用引物菌落PCR筛菌就得不到了，不知道是连接效率低下，还是怎么着，明明氨苄板上长得很好，但是却无法得到基因，有谁碰到过这种情况，有什么解决办法吗。。
我现在都强迫了。。。:dnd::dnd:
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会做饭就会做实验？
1楼 2010-04-29 16:41:59
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liyong1981

金虫 (正式写手)
骚人追月(金币+2):我高保真的酶扩完之后，又用一般的酶加尾了，而且自连的效率这么高吗。。一个板子长了很多 2010-04-29 17:04
没有连接上吧，。你用的是高保真酶做的么？如果是，就不能TA克隆，因为高保真酶不会产生A，另外，你板子长得很可能是自连的，一般来说TA克隆，连接效率相当的高，希望对你有帮助
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2楼2010-04-29 16:47:42
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
肯定是自连
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3楼2010-04-29 17:40:50
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)
骚人追月(金币+1):谢谢 2010-05-21 16:42:12
应该是假阳性
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4楼2010-04-29 23:05:51
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liyong1981

金虫 (正式写手)
加尾的话，你能保证加上？或者加的数量？我觉得还是用一般的吧，不会有那么多突变的，
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5楼2010-04-30 09:04:13
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塞外雨

金虫 (著名写手)
骚人追月(金币+1):谢谢 2010-05-21 16:42:03
自连啊，你使用一般的酶就行了，别用高保真的酶扩增
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
6楼2010-04-30 09:36:13
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