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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR后只有模板
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hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR后只有模板

我PCR之后，做酶切，连接，转化，挑了单克隆送测序，发现我P的那段只有模板，没有我要扩展的那几个碱基？这是怎么回事啊？
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1楼 2010-12-29 18:48:31
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-29 21:29:32
hutingting(金币+2): 2010-12-30 08:51:08
首先，你的表达好像不太准确，是回收的PCR产物在进行连接，在做后面的实验吧，。你可以咨询下测序公司，看看是哪里出了问题，测序也不是所有的碱基都能准确的测出，也有发生错误的几率
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2楼2010-12-29 20:46:37
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wangying052

新虫 (初入文坛)
★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-12-29 21:29:55
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:40
是不是引物的问题，看你的表达好像是问题出在了PCR上。。。
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3楼2010-12-29 21:23:42
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06233053

荣誉版主 (文坛精英)
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:45
没连接上？
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4楼2010-12-29 21:37:10
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天龙n部

金虫 (小有名气)
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:50
你做每一步都做个PCR验证下，就不会出现上述情况了
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5楼2010-12-29 21:38:30
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hfkset

铜虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
表述不是很清楚啊，发现我P的那段只有模板，没有我要扩展的那几个碱基，是什么意思？
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6楼2010-12-30 10:05:41
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j2

木虫 (正式写手)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
没连上吧？？？
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7楼2010-12-30 19:02:18
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Michael008

新虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
hutingting(金币+2): 2011-01-05 10:05:22
我也没大看明白，PCR不就是要扩模板上的序列吗？你的意思是你在引物中加入了新的序列？
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8楼2010-12-30 21:48:47
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
连接后再做酶切鉴定和PCR鉴定
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9楼2010-12-31 08:40:25
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hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Michael008 at 2010-12-30 21:48:47:
我也没大看明白，PCR不就是要扩模板上的序列吗？你的意思是你在引物中加入了新的序列？

是的  我是在引物中引入了一个碱基
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10楼2011-01-05 10:06:53
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nigel.lin

银虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
建议再挑几个单克隆去测序。如果还是那样，应该是引物问题。。
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11楼2011-01-05 10:21:03
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DH5a

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把保护碱基多加几个，可能是掉了
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12楼2011-01-05 10:56:34
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DH5a

银虫 (小有名气)
说错了，我们一般采用PCR的方法，不用连接，因为加的碱基个数太少
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13楼2011-01-05 10:57:50
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