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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hutingting

银虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】PCR后只有模板

我PCR之后,做酶切,连接,转化,挑了单克隆送测序,发现我P的那段只有模板,没有我要扩展的那几个碱基?这是怎么回事啊?
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xuexue1204

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-29 21:29:32
hutingting(金币+2): 2010-12-30 08:51:08
首先,你的表达好像不太准确,是回收的PCR产物在进行连接,在做后面的实验吧,。你可以咨询下测序公司,看看是哪里出了问题,测序也不是所有的碱基都能准确的测出,也有发生错误的几率
2楼2010-12-29 20:46:37
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wangying052

新虫 (初入文坛)


★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-12-29 21:29:55
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:40
是不是引物的问题,看你的表达好像是问题出在了PCR上。。。
3楼2010-12-29 21:23:42
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06233053

荣誉版主 (文坛精英)



hutingting(金币+2):谢谢参与
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:45
没连接上?
4楼2010-12-29 21:37:10
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天龙n部

金虫 (小有名气)



hutingting(金币+2):谢谢参与
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:50
你做每一步都做个PCR验证下,就不会出现上述情况了
5楼2010-12-29 21:38:30
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hfkset

铜虫 (初入文坛)



hutingting(金币+1):谢谢参与
表述不是很清楚啊,发现我P的那段只有模板,没有我要扩展的那几个碱基,是什么意思?
6楼2010-12-30 10:05:41
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j2

木虫 (正式写手)



hutingting(金币+1):谢谢参与
没连上吧???
7楼2010-12-30 19:02:18
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Michael008

新虫 (初入文坛)



hutingting(金币+1):谢谢参与
hutingting(金币+2): 2011-01-05 10:05:22
我也没大看明白,PCR不就是要扩模板上的序列吗?你的意思是你在引物中加入了新的序列?
8楼2010-12-30 21:48:47
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)



hutingting(金币+1):谢谢参与
连接后再做酶切鉴定和PCR鉴定
9楼2010-12-31 08:40:25
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hutingting

银虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by Michael008 at 2010-12-30 21:48:47:
我也没大看明白,PCR不就是要扩模板上的序列吗?你的意思是你在引物中加入了新的序列?

是的  我是在引物中引入了一个碱基
10楼2011-01-05 10:06:53
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nigel.lin

银虫 (初入文坛)



hutingting(金币+1):谢谢参与
建议再挑几个单克隆去测序。如果还是那样,应该是引物问题。。
11楼2011-01-05 10:21:03
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DH5a

银虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
把保护碱基多加几个,可能是掉了
12楼2011-01-05 10:56:34
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DH5a

银虫 (小有名气)


说错了,我们一般采用PCR的方法,不用连接,因为加的碱基个数太少
13楼2011-01-05 10:57:50
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