应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR后只有模板
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/1返回列表
查看: 1342  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR后只有模板

我PCR之后，做酶切，连接，转化，挑了单克隆送测序，发现我P的那段只有模板，没有我要扩展的那几个碱基？这是怎么回事啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-29 18:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuexue1204

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-29 21:29:32
hutingting(金币+2): 2010-12-30 08:51:08
首先，你的表达好像不太准确，是回收的PCR产物在进行连接，在做后面的实验吧，。你可以咨询下测序公司，看看是哪里出了问题，测序也不是所有的碱基都能准确的测出，也有发生错误的几率
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-29 20:46:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangying052

新虫 (初入文坛)
★ ★
hutingting(金币+2):谢谢参与
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-12-29 21:29:55
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:40
是不是引物的问题，看你的表达好像是问题出在了PCR上。。。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-29 21:23:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

06233053

荣誉版主 (文坛精英)
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:45
没连接上？
回复此楼
4楼2010-12-29 21:37:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天龙n部

金虫 (小有名气)
★
hutingting(金币+2):谢谢参与
hutingting(金币+1): 2010-12-30 08:51:50
你做每一步都做个PCR验证下，就不会出现上述情况了
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-12-29 21:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hfkset

铜虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
表述不是很清楚啊，发现我P的那段只有模板，没有我要扩展的那几个碱基，是什么意思？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-12-30 10:05:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
没连上吧？？？
回复此楼
7楼2010-12-30 19:02:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Michael008

新虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
hutingting(金币+2): 2011-01-05 10:05:22
我也没大看明白，PCR不就是要扩模板上的序列吗？你的意思是你在引物中加入了新的序列？
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-12-30 21:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuqingchun33

银虫 (小有名气)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
连接后再做酶切鉴定和PCR鉴定
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-12-31 08:40:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Michael008 at 2010-12-30 21:48:47:
我也没大看明白，PCR不就是要扩模板上的序列吗？你的意思是你在引物中加入了新的序列？

是的  我是在引物中引入了一个碱基
赞一下 回复此楼
10楼2011-01-05 10:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nigel.lin

银虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+1):谢谢参与
建议再挑几个单克隆去测序。如果还是那样，应该是引物问题。。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-01-05 10:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DH5a

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把保护碱基多加几个，可能是掉了
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-01-05 10:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DH5a

银虫 (小有名气)
说错了，我们一般采用PCR的方法，不用连接，因为加的碱基个数太少
赞一下 回复此楼
13楼2011-01-05 10:57:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hutingting 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +6 dongfang59 2026-03-27 6/300 2026-03-30 20:05 by 源_2020
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +13 丹青奶盖 2026-03-26 15/750 2026-03-30 12:35 by fangnagu
[考研] 282求调剂 +4 wcq131415 2026-03-24 4/200 2026-03-30 10:39 by Delta2012
[考研] 375求调剂 +6 雨夏整夜 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:21 by herarysara
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +6 零八# 2026-03-28 6/300 2026-03-29 21:20 by nanaliuyun
[考研] 一志愿双一流机械285分求调剂 +4 幸运的三木 2026-03-29 5/250 2026-03-29 14:49 by Miko19
[考研] 283求调剂 +3 A child 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:41 by ms629
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 320分，材料与化工专业，求调剂 +9 一定上岸aaa 2026-03-27 13/650 2026-03-28 15:00 by 神马都不懂
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭