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guanxn90

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于转化拟南芥的问题已有6人参与

我用农杆菌介导的floral dip method转化拟南芥,现在已经转化出第一代了,要筛选第二代。

种子消毒处理方法为:70%乙醇1min;后用1倍的次氯酸处理10min。然后,在超菌工作台中把种子均匀地涂在MS培养基上。MS培养基加了抗生素Carb,和Kana,因为载体上有kana抗性。

都两周了,但为什么我筛的种子发芽了但不长根呢?[/color]

谢谢大家!

[ Last edited by guanxn90 on 2010-12-26 at 19:36 ]
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wangying052

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-30 09:00:30
或许这是表型。。。又或许是灭菌太严重了,我们用75%乙醇2min,100%乙醇+吐温10min就好了
2楼2010-12-28 10:28:54
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-30 09:00:40
用10%的次氯酸钠试试,20%等浓度过高,容易将种子消毒死掉!
3楼2010-12-29 20:53:03
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夜舞龙

至尊木虫 (知名作家)

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-30 09:00:51
抗生素浓度过高就会导致发芽不长根,所以也有可能是这个原因。
4楼2010-12-29 21:12:37
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guanxn90

新虫 (初入文坛)

拟南芥转化---不长根

★ ★
dhd997(金币+2):鼓励回帖总结 2010-12-30 09:01:13
谢谢大家的回答。

现在总结如下:抗生素浓度过高可能会导致只发芽不长根;
              消毒液浓度过高;


我的处理是:70%乙醇1min;9倍的次氯酸稀释成1倍的用+一点吐温10mins;然后用水洗,悬浮后涂在MS培养基上。

实验室的师兄说可能是因为涂过平板后,平板太干了,导致根长不进培养基了。

我想如果是有什么原因导致对种子有伤害的话,不至于只伤根不伤叶吧?

谢谢各位。
5楼2010-12-29 23:06:20
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A406

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
为什么加羧苄青霉素呢?
6楼2011-11-14 22:36:48
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yuanuancao

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以用10%双氧水5-10分钟消毒,效果很好
7楼2013-01-30 10:34:31
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