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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于转化拟南芥的问题
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guanxn90

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于转化拟南芥的问题 已有6人参与

我用农杆菌介导的floral dip method转化拟南芥，现在已经转化出第一代了，要筛选第二代。

种子消毒处理方法为：70%乙醇1min；后用1倍的次氯酸处理10min。然后，在超菌工作台中把种子均匀地涂在MS培养基上。MS培养基加了抗生素Carb，和Kana，因为载体上有kana抗性。

都两周了，但为什么我筛的种子发芽了，但不长根呢？[/color]

谢谢大家！

[ Last edited by guanxn90 on 2010-12-26 at 19:36 ]
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1楼 2010-12-26 19:34:51
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wangying052

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-30 09:00:30
或许这是表型。。。又或许是灭菌太严重了，我们用75%乙醇2min,100%乙醇+吐温10min就好了
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2楼2010-12-28 10:28:54
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-30 09:00:40
用10%的次氯酸钠试试，20%等浓度过高，容易将种子消毒死掉！
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3楼2010-12-29 20:53:03
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夜舞龙

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-30 09:00:51
抗生素浓度过高就会导致发芽不长根，所以也有可能是这个原因。
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4楼2010-12-29 21:12:37
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guanxn90

新虫 (初入文坛)

拟南芥转化---不长根

★ ★
dhd997(金币+2):鼓励回帖总结 2010-12-30 09:01:13
谢谢大家的回答。

现在总结如下：抗生素浓度过高可能会导致只发芽不长根；
              消毒液浓度过高；


我的处理是：70%乙醇1min；9倍的次氯酸稀释成1倍的用+一点吐温10mins；然后用水洗，悬浮后涂在MS培养基上。

实验室的师兄说可能是因为涂过平板后，平板太干了，导致根长不进培养基了。

我想如果是有什么原因导致对种子有伤害的话，不至于只伤根不伤叶吧？

谢谢各位。
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5楼2010-12-29 23:06:20
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A406

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
为什么加羧苄青霉素呢？
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6楼2011-11-14 22:36:48
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yuanuancao

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用10%双氧水5-10分钟消毒，效果很好
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7楼2013-01-30 10:34:31
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