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骚人追月

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】转化后,提质粒无法得到目的基因 已有4人参与

本人扩一个基因,回收后连接转化进pMD18-T,然后再用引物菌落PCR筛菌就得不到了,不知道是连接效率低下,还是怎么着,明明氨苄板上长得很好,但是却无法得到基因,有谁碰到过这种情况,有什么解决办法吗。。
我现在都强迫了。。。:dnd::dnd:
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会做饭就会做实验?
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liyong1981

金虫 (正式写手)


加尾的话,你能保证加上?或者加的数量?我觉得还是用一般的吧,不会有那么多突变的,
5楼2010-04-30 09:04:13
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liyong1981

金虫 (正式写手)


骚人追月(金币+2):我高保真的酶扩完之后,又用一般的酶加尾了,而且自连的效率这么高吗。。一个板子长了很多 2010-04-29 17:04
没有连接上吧,。你用的是高保真酶做的么?如果是,就不能TA克隆,因为高保真酶不会产生A,另外,你板子长得很可能是自连的,一般来说TA克隆,连接效率相当的高,希望对你有帮助
2楼2010-04-29 16:47:42
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塞外雨

金虫 (著名写手)

骚人追月(金币+1):谢谢 2010-05-21 16:42:03
自连啊,你使用一般的酶就行了,别用高保真的酶扩增
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
6楼2010-04-30 09:36:13
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