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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化中出现的奇怪现象
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 【求助/交流】转化中出现的奇怪现象 已有11人参与

我将载体与目的片段相连接，转化DH5a，氯霉素抗性。可是挑取单菌落于液体培养基中培养，10小时左右，长出来的菌液呈现灰绿色。提质粒没有条带，但是以提取的质粒为模板进行PCR，有目的条带生成。最初认为是质粒深度过低，进行超浓缩后电泳依然无条带。我都重复了几次实验，都是这种状况，不知道问题出在哪里？恳请大家帮我分析，指点迷津~~
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
1楼 2010-04-21 14:05:25
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wsshforget

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
bettyshan(金币+1): 2010-04-21 18:55
应该是假阳性或者污染了，重新做吧，不用重复做了，我也遇到过这种情况。
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2楼2010-04-21 16:06:44
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
bettyshan(金币+1):谢谢 2010-04-21 18:55
PCR鉴定假阳性几率非常高的！应该重新连接转化。。。。。。
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大家共同交流、共同提高！！！
3楼2010-04-21 18:39:45
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★
bettyshan(金币+1):谢谢参与
同意楼上，PCR不可靠，得双酶切鉴定才行
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4楼2010-04-21 19:03:57
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guoenwen

金虫 (小有名气)
★
bettyshan(金币+1):谢谢参与
做个显微镜检测，看一下长出来的是什么东西，不会是污染了吧。
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5楼2010-04-21 20:09:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
bettyshan(金币+1):谢谢参与
估计氯霉素培养基失效了
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6楼2010-04-21 20:35:18
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fxy0570

金虫 (正式写手)
★
bettyshan(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by wsshforget at 2010-04-21 16:06:44:
应该是假阳性或者污染了，重新做吧，不用重复做了，我也遇到过这种情况。

同意所说，我也是这么想的。最好做酶切鉴定！
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7楼2010-04-21 20:38:08
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★
bettyshan(金币+1):谢谢参与
应该是PCR,单，双酶切的结果都正确才可靠。
我以前做单，双酶切都对，就是PCR不出来，测序发现就是假阳性的~~
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8楼2010-04-21 21:01:04
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★
bettyshan(金币+1):谢谢参与
首先培养10小时后菌液呈灰绿色，我觉得是不正常的，应当是污染的问题。另外我建议你在摇培的液体培养基里也加上氯霉素，37度，过夜摇，然后用菌液做模板，，进行pcr。再进行双酶切检测。
还有就是在将转化的大肠杆菌过夜培养后，取出培养基在四度放置4小时，这样一些“假”的白斑就会变成蓝色。
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多看文献，多学知识
9楼2010-04-22 16:52:27
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qjl0801

铁虫 (初入文坛)
★
bettyshan(金币+1):谢谢参与
同意楼上所说的，pcr假阳性的很有可能
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10楼2010-04-22 21:13:22
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