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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】奇怪的转化结果，请大家帮分析,谢谢！
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gsf313

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】奇怪的转化结果，请大家帮分析,谢谢！ 已有13人参与

我使用的载体pHANNIBAL（5819bp）,EcoR I 和 Xho I分步酶切后，插入一个大约950bp的片段，涂板情况长的不错，挑菌后作PCR，也能扩到条带，但是再摇菌提质粒后，跑胶的带才不到4000，请大家分析下，可能是什么情况？


请注意：EcoR I 和 Xho I之间只差6个碱基
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1楼 2010-05-17 11:16:39
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guotieying

银虫 (正式写手)
污染
可能
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本来无一物，何处惹尘埃。
2楼2010-05-17 11:21:40
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-17 13:05:09
你用的什么菌？是不是重组了，建议30度摇菌试一下

希望对你有所帮助
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3楼2010-05-17 11:22:03
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-17 13:05:24
可能EcoR I 和 Xho I酶加多了，出现了星星活性，导致载体pHANNIBAL被乱切了
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4楼2010-05-17 11:22:24
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★
lstt09nk(金币+1):同意~~ 2010-05-17 15:39:28
gsf313(金币+5):谢谢建议 2010-05-25 09:24:18
提质粒后你单酶切了吗？如果直接跑质粒，电泳条带不能确定的。
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5楼2010-05-17 11:25:27
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yyb870809

铁杆木虫 (初入文坛)
同意楼上   质粒是不能比较大小的
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6楼2010-05-17 12:49:03
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gsf313

铁虫 (小有名气)
没有酶切呢，我现在试试
谢谢大家
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7楼2010-05-17 14:57:04
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
我建议你酶切一下再跑，质粒由于超螺旋结构，通常是测不准的
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快乐家族
8楼2010-05-17 16:25:55
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jasco

木虫 (正式写手)
超螺旋的质粒在4k位置正常的啊，酶切再电泳，并测序验证
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9楼2010-05-17 16:58:21
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zzw1221

木虫 (著名写手)
酶切再pcr验证
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10楼2010-05-17 17:16:57
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