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gsf313

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】奇怪的转化结果,请大家帮分析,谢谢! 已有13人参与

我使用的载体pHANNIBAL(5819bp),EcoR I 和 Xho I分步酶切后,插入一个大约950bp的片段,涂板情况长的不错,挑菌后作PCR,也能扩到条带,但是再摇菌提质粒后,跑胶的带才不到4000,请大家分析下,可能是什么情况?


请注意:EcoR I 和 Xho I之间只差6个碱基
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guotieying

银虫 (正式写手)

本来无一物,何处惹尘埃。
2楼2010-05-17 11:21:40
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liyong1981

金虫 (正式写手)



1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-17 13:05:09
你用的什么菌?是不是重组了,建议30度摇菌试一下

希望对你有所帮助
3楼2010-05-17 11:22:03
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)


1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-17 13:05:24
可能EcoR I 和 Xho I酶加多了,出现了星星活性,导致载体pHANNIBAL被乱切了
4楼2010-05-17 11:22:24
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cqyniu

金虫 (小有名气)


lstt09nk(金币+1):同意~~ 2010-05-17 15:39:28
gsf313(金币+5):谢谢建议 2010-05-25 09:24:18
提质粒后你单酶切了吗?如果直接跑质粒,电泳条带不能确定的。
5楼2010-05-17 11:25:27
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yyb870809

铁杆木虫 (初入文坛)

同意楼上   质粒是不能比较大小的
6楼2010-05-17 12:49:03
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gsf313

铁虫 (小有名气)

没有酶切呢,我现在试试
谢谢大家
7楼2010-05-17 14:57:04
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八

我建议你酶切一下再跑,质粒由于超螺旋结构,通常是测不准的
快乐家族
8楼2010-05-17 16:25:55
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jasco

木虫 (正式写手)

超螺旋的质粒在4k位置正常的啊,酶切再电泳,并测序验证
9楼2010-05-17 16:58:21
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zzw1221

木虫 (著名写手)

酶切再pcr验证
10楼2010-05-17 17:16:57
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