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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片
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xpb2005

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片 已有29人参与





为什么我P完后一跑胶就成这种结果，是不是什么加多了，请大家分析分析。我的体系是：双蒸水15.7  ，10XBUFFER   2.5，DNTP  2.0，镁离子2.0，引物各1，酶0.3，模板0.5，总体系是25微升。我用这个体系前两天做出来了，别人用这个体系也出条带了，但第三天做出来就成这结果了。而且以前做出的现在也不出了，我跑胶时百分之2.0的胶，90伏跑50分钟。
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1楼 2010-04-24 10:31:52
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:24
PCR牵扯的因素很多，寻找原因很难，再做一遍吧。
模板用错了、退火温度太高、引物少加一条、酶的活性有问题等都有可能
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
2楼2010-04-24 10:43:32
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1):？ 2010-04-30 10:24
模板浓度会导致P不出来吗？别人说我跑胶的电压太低了，产物降解了，我觉得应该不会在跑胶时降解吧，这种可能性太小了吧
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3楼2010-04-24 10:48:31
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xpb2005

银虫 (小有名气)
为什么泳道会全白呢？
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4楼2010-04-24 10:49:11
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):欢迎多多交流~~ 2010-04-24 12:39
我觉得是你的模板出问题了。可能是被污染降解了，建议你跑一下模板。如果没问题，那就可能是你的PCR体系或者程序出问题了。再者如果你模板的量加的太多，也会出现图中弥散的情况，可现在你根本就看不见有目的条带出现
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5楼2010-04-24 10:57:06
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2):欢迎发图 2010-04-30 10:24





第一张图片是我P出来后用1.2的胶120伏跑的，第二张是我用2.0的胶90伏跑的，都是同一个产物，第二张上能看见有条带，比较模糊，MANKER 是DL1000，最亮的那个带是400。本来想着用60°退火可以出带，我就用58试了下，居然没带。
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6楼2010-04-24 11:08:10
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ydniu

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:24
好像是模板太多了，不知用的是什么模板？浓度多大？
和电泳时的电压关系应该不太大。
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7楼2010-04-24 11:17:36
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:24
呵呵，你再用能跑出来的那个程序做一下，不过你得少加模板的量了（如稀释10倍或50倍之类的再加），那白色的背景是模板啊。先解决背景再考虑优化程序。试试吧
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8楼2010-04-24 11:20:46
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xpb2005

银虫 (小有名气)
模板是小麦叶片的，没测过浓度。
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9楼2010-04-24 11:29:01
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:25
呵呵，先跑一下模板保证没污染再按我上面说的试一下吧
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10楼2010-04-24 11:40:22
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