【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片 - 动植物 - 综合其他

21楼2010-04-25 20:15:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 548
红花: 1
帖子: 254
在线: 68小时
虫号: 985644
注册: 2010-03-30
专业: 植物生理与生化

引用回帖:

Originally posted by 李忠虎 at 2010-04-25 20:15:09:
我觉得是DNA模板质量不高，或者是反应混合物被污染了

我也觉得是模板质量不好，但老师说可以，挺好的，真不知道是咋回事？

22楼2010-04-26 16:50:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 548
红花: 1
帖子: 254
在线: 68小时
虫号: 985644
注册: 2010-03-30
专业: 植物生理与生化

引用回帖:

Originally posted by 李忠虎 at 2010-04-25 20:15:09:
我觉得是DNA模板质量不高，或者是反应混合物被污染了

每次做都是这样，管有没有条带，整个泳道都是白的，不知道啥原因

23楼2010-04-26 16:51:50

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

六妖妖

金虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 1356.1
帖子: 514
在线: 68.9小时
虫号: 664367
注册: 2008-11-29
性别: MM
专业: 作物分子育种

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:26

楼上很多同志都说你的模板质量有问题了。PCR抑制剂过多吧。不知道你是用什么方法提取的。换个提取方式试试会不会有所改变。对提取过程中的试剂配制会不会带入太多的杂质。

24楼2010-04-29 16:00:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 774.1
散金: 116
帖子: 905
在线: 35.2小时
虫号: 357405
注册: 2007-04-27
性别: GG
专业: antibody

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-30 15:48

PCR有时候很不稳定，我还是建议你换模板，或者跑个梯度，希望对你有所帮助

25楼2010-04-29 16:52:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

邓远洪dyh

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 135.8
散金: 1
红花: 1
帖子: 117
在线: 37.3小时
虫号: 987142
注册: 2010-04-01
性别: GG
专业: 生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

还有一个就是胶制好后要放置一段时间，最好放于4度TAE中冷一下

赞一下(1人)

26楼2010-04-30 09:20:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

应助: 4 (幼儿园)
贵宾: 0.804
金币: 1088.2
散金: 250
红花: 3
帖子: 473
在线: 65.7小时
虫号: 643243
注册: 2008-11-01
专业: 生物化学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-30 15:48

引用回帖:

Originally posted by liyong1981 at 2010-04-29 16:52:45:
PCR有时候很不稳定，我还是建议你换模板，或者跑个梯度，希望对你有所帮助

我觉得基因这东西，你对自己的实验是最熟悉的，哪个地方有疏漏，自己应该知道，认真点，再试试吧，总会出来原因的

严于律己，宽以待人

27楼2010-04-30 10:43:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 548
红花: 1
帖子: 254
在线: 68小时
虫号: 985644
注册: 2010-03-30
专业: 植物生理与生化

引用回帖:

Originally posted by 六妖妖 at 2010-04-29 16:00:12:
楼上很多同志都说你的模板质量有问题了。PCR抑制剂过多吧。不知道你是用什么方法提取的。换个提取方式试试会不会有所改变。对提取过程中的试剂配制会不会带入太多的杂质。

我是用CTAB法提的小麦叶片的基因组DNA，还有就是我这是转基因植株

28楼2010-04-30 15:46:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

honjie

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 9119.7
红花: 1
帖子: 608
在线: 46.8小时
虫号: 44335
注册: 2004-04-24
性别: GG
专业: 传染病媒介生物

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

把模板（估计你提的是gDNA吧）做倍比稀释，然后跑模板浓度梯度试试看，举个例子，我曾用单蚊提过gDNA，然后50ul溶解，再稀释10000倍，取5ul为模板进行PCR，一样可以扩增出条带的。

赞一下(1人)

29楼2010-04-30 15:51:28

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 548
红花: 1
帖子: 254
在线: 68小时
虫号: 985644
注册: 2010-03-30
专业: 植物生理与生化

引用回帖:

Originally posted by liyong1981 at 2010-04-29 16:52:45:
PCR有时候很不稳定，我还是建议你换模板，或者跑个梯度，希望对你有所帮助

我总共提了2000多份样品，都检测好几百分了，就出来了56个有目的基因，其他的一P就如前面的图一样，梯度也跑了，结果都是一个样子，还有就是我的阳性对照每次P都会出，就是样品不出。