【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片 - 动植物 - 综合其他

21楼2010-04-25 20:15:09

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Originally posted by 李忠虎 at 2010-04-25 20:15:09:
我觉得是DNA模板质量不高，或者是反应混合物被污染了

我也觉得是模板质量不好，但老师说可以，挺好的，真不知道是咋回事？

22楼2010-04-26 16:50:53

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Originally posted by 李忠虎 at 2010-04-25 20:15:09:
我觉得是DNA模板质量不高，或者是反应混合物被污染了

每次做都是这样，管有没有条带，整个泳道都是白的，不知道啥原因

23楼2010-04-26 16:51:50

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六妖妖

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1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:26

楼上很多同志都说你的模板质量有问题了。PCR抑制剂过多吧。不知道你是用什么方法提取的。换个提取方式试试会不会有所改变。对提取过程中的试剂配制会不会带入太多的杂质。

24楼2010-04-29 16:00:12

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liyong1981

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PCR有时候很不稳定，我还是建议你换模板，或者跑个梯度，希望对你有所帮助

25楼2010-04-29 16:52:45

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邓远洪dyh

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还有一个就是胶制好后要放置一段时间，最好放于4度TAE中冷一下

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26楼2010-04-30 09:20:32

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最爱花诗雨

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引用回帖:

Originally posted by liyong1981 at 2010-04-29 16:52:45:
PCR有时候很不稳定，我还是建议你换模板，或者跑个梯度，希望对你有所帮助

我觉得基因这东西，你对自己的实验是最熟悉的，哪个地方有疏漏，自己应该知道，认真点，再试试吧，总会出来原因的

严于律己，宽以待人

27楼2010-04-30 10:43:35

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Originally posted by 六妖妖 at 2010-04-29 16:00:12:
楼上很多同志都说你的模板质量有问题了。PCR抑制剂过多吧。不知道你是用什么方法提取的。换个提取方式试试会不会有所改变。对提取过程中的试剂配制会不会带入太多的杂质。

我是用CTAB法提的小麦叶片的基因组DNA，还有就是我这是转基因植株

28楼2010-04-30 15:46:41

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honjie

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把模板（估计你提的是gDNA吧）做倍比稀释，然后跑模板浓度梯度试试看，举个例子，我曾用单蚊提过gDNA，然后50ul溶解，再稀释10000倍，取5ul为模板进行PCR，一样可以扩增出条带的。

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29楼2010-04-30 15:51:28

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Originally posted by liyong1981 at 2010-04-29 16:52:45:
PCR有时候很不稳定，我还是建议你换模板，或者跑个梯度，希望对你有所帮助

我总共提了2000多份样品，都检测好几百分了，就出来了56个有目的基因，其他的一P就如前面的图一样，梯度也跑了，结果都是一个样子，还有就是我的阳性对照每次P都会出，就是样品不出。