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xpb2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chentao3320 at 2010-05-26 10:11:46:

我用别人的引物加我的模板可以扩出带，所以我觉得模板应该没问题
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41楼2010-05-26 12:08:45
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xpb2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hhh19870612 at 2010-05-21 22:37:02:
可能是你操作过程出现错误，而这些错误没有办法看出来，一般正确的操作p出来的凝胶是比较平整的，不会像你那有，我觉得你还是重新再做一次的，慢慢做，胶体要充分凝结以后再进行电泳

我每次做的阳性对照都可以出带，也没有拖带，就是样品老出现这种问题，
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42楼2010-05-26 12:10:17
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
★
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胶片显示：
        没有扩增产物
        最前面的是引物二聚体，说明你酶没有问题，在换下其他条件试试。
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望大家都各有所获！
43楼2010-05-26 12:19:27
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scien55

银虫 (小有名气)
★
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模板  或者酶的问题
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好好学习天天向上
44楼2010-05-26 14:08:08
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
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试一下NEB公司的超保真酶，用其中的GC buffer，对于一些结构复杂的模板效果很好。不妨一试。
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45楼2010-05-26 14:44:43
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
★
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模板加太多,引物加太多,dntp加太多都会引起这样的条带,还有模板不纯,有蛋白也会这样
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46楼2010-05-26 15:22:26
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luozhen2008

木虫 (正式写手)

解决

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的模板是用的什么呀？里面可能有RNA，RNA降解导致的泳道都是白的，建议用干净点的模板，模板尽量的少加，引物也加多了，少加点，PCR的退火温度下调点。
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47楼2010-05-26 15:57:26
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ulicy

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有以下几个问题：
1，pcr条件不好，需要调节镁离子浓度或者Tm温度，建议你重新跑温度梯度和镁离子梯度。
2，检查你的模板，你的有几条带是特别大，很有可能是什么 污染了。
3，第三个电泳图有目标带？下面有很亮的杂带。需要你提高退火温度。如果目标带在500bp的话，你只需延伸30s就可以了。
4，第三个电泳图可以得出，你的模板确实有问题，要是标本不珍贵就重新提DNA吧，记得以后要把DNA 的质量弄好一点
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48楼2010-05-26 17:10:58
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ulicy

你可以用一些试剂公司的PCR mix，按照说明可能能跑的很好
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49楼2010-05-26 17:12:20
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xpb2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ulicy at 2010-05-26 17:12:20:
你可以用一些试剂公司的PCR mix，按照说明可能能跑的很好

用的是天跟的MIX，做出来效果是一样的
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50楼2010-05-27 20:40:57
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