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xpb2005

银虫 (小有名气)

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Originally posted by chentao3320 at 2010-05-26 10:11:46:

我用别人的引物加我的模板可以扩出带,所以我觉得模板应该没问题
41楼2010-05-26 12:08:45
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xpb2005

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hhh19870612 at 2010-05-21 22:37:02:
可能是你操作过程出现错误,而这些错误没有办法看出来,一般正确的操作p出来的凝胶是比较平整的,不会像你那有,我觉得你还是重新再做一次的,慢慢做,胶体要充分凝结以后再进行电泳

我每次做的阳性对照都可以出带,也没有拖带,就是样品老出现这种问题,
42楼2010-05-26 12:10:17
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
胶片显示:
        没有扩增产物
        最前面的是引物二聚体,说明你酶没有问题,在换下其他条件试试。
望大家都各有所获!
43楼2010-05-26 12:19:27
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scien55

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板  或者酶的问题
好好学习天天向上
44楼2010-05-26 14:08:08
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
试一下NEB公司的超保真酶,用其中的GC buffer,对于一些结构复杂的模板效果很好。不妨一试。
45楼2010-05-26 14:44:43
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mofatuzi

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板加太多,引物加太多,dntp加太多都会引起这样的条带,还有模板不纯,有蛋白也会这样
46楼2010-05-26 15:22:26
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luozhen2008

木虫 (正式写手)

解决


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的模板是用的什么呀?里面可能有RNA,RNA降解导致的泳道都是白的,建议用干净点的模板,模板尽量的少加,引物也加多了,少加点,PCR的退火温度下调点。
47楼2010-05-26 15:57:26
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ulicy


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有以下几个问题:
1,pcr条件不好,需要调节镁离子浓度或者Tm温度,建议你重新跑温度梯度和镁离子梯度。
2,检查你的模板,你的有几条带是特别大,很有可能是什么 污染了。
3,第三个电泳图有目标带?下面有很亮的杂带。需要你提高退火温度。如果目标带在500bp的话,你只需延伸30s就可以了。
4,第三个电泳图可以得出,你的模板确实有问题,要是标本不珍贵就重新提DNA吧,记得以后要把DNA 的质量弄好一点
48楼2010-05-26 17:10:58
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ulicy

你可以用一些试剂公司的PCR mix,按照说明可能能跑的很好
49楼2010-05-26 17:12:20
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xpb2005

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ulicy at 2010-05-26 17:12:20:
你可以用一些试剂公司的PCR mix,按照说明可能能跑的很好

用的是天跟的MIX,做出来效果是一样的
50楼2010-05-27 20:40:57
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