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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xpb2005

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片 已有29人参与





为什么我P完后一跑胶就成这种结果，是不是什么加多了，请大家分析分析。我的体系是：双蒸水15.7  ，10XBUFFER   2.5，DNTP  2.0，镁离子2.0，引物各1，酶0.3，模板0.5，总体系是25微升。我用这个体系前两天做出来了，别人用这个体系也出条带了，但第三天做出来就成这结果了。而且以前做出的现在也不出了，我跑胶时百分之2.0的胶，90伏跑50分钟。
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1楼 2010-04-24 10:31:52
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ulicy

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有以下几个问题：
1，pcr条件不好，需要调节镁离子浓度或者Tm温度，建议你重新跑温度梯度和镁离子梯度。
2，检查你的模板，你的有几条带是特别大，很有可能是什么 污染了。
3，第三个电泳图有目标带？下面有很亮的杂带。需要你提高退火温度。如果目标带在500bp的话，你只需延伸30s就可以了。
4，第三个电泳图可以得出，你的模板确实有问题，要是标本不珍贵就重新提DNA吧，记得以后要把DNA 的质量弄好一点
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48楼2010-05-26 17:10:58
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:24
PCR牵扯的因素很多，寻找原因很难，再做一遍吧。
模板用错了、退火温度太高、引物少加一条、酶的活性有问题等都有可能
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
2楼2010-04-24 10:43:32
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1):？ 2010-04-30 10:24
模板浓度会导致P不出来吗？别人说我跑胶的电压太低了，产物降解了，我觉得应该不会在跑胶时降解吧，这种可能性太小了吧
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3楼2010-04-24 10:48:31
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xpb2005

银虫 (小有名气)
为什么泳道会全白呢？
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4楼2010-04-24 10:49:11
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