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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片
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银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片 已有29人参与





为什么我P完后一跑胶就成这种结果，是不是什么加多了，请大家分析分析。我的体系是：双蒸水15.7  ，10XBUFFER   2.5，DNTP  2.0，镁离子2.0，引物各1，酶0.3，模板0.5，总体系是25微升。我用这个体系前两天做出来了，别人用这个体系也出条带了，但第三天做出来就成这结果了。而且以前做出的现在也不出了，我跑胶时百分之2.0的胶，90伏跑50分钟。
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1楼 2010-04-24 10:31:52
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银虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1):？ 2010-04-30 10:24
模板浓度会导致P不出来吗？别人说我跑胶的电压太低了，产物降解了，我觉得应该不会在跑胶时降解吧，这种可能性太小了吧
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3楼2010-04-24 10:48:31
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银虫 (小有名气)
为什么泳道会全白呢？
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4楼2010-04-24 10:49:11
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银虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2):欢迎发图 2010-04-30 10:24





第一张图片是我P出来后用1.2的胶120伏跑的，第二张是我用2.0的胶90伏跑的，都是同一个产物，第二张上能看见有条带，比较模糊，MANKER 是DL1000，最亮的那个带是400。本来想着用60°退火可以出带，我就用58试了下，居然没带。
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6楼2010-04-24 11:08:10
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银虫 (小有名气)
模板是小麦叶片的，没测过浓度。
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9楼2010-04-24 11:29:01
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银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chuan2388 at 2010-04-24 12:30:20:
问题应该出在模板上，可以先换一个模板试试，算是做个阳性对照，如果正常应该可以扩增出东西的；然后就是对你的实验模板做纯化了。

我也觉得模板有问题，或许是不纯，或许是浓度太高了
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12楼2010-04-24 15:18:08
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银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wuzhx96 at 2010-04-24 15:45:56:
我觉得是你的模板出问题了。可能是被污染降解了，建议你跑一下模板

模板我跑过了，应该没降解。
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14楼2010-04-24 15:58:08
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银虫 (小有名气)
补充下，我的阳性对照可以出带，就是样品不出，模板要纯化的话，该怎么做呢？
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15楼2010-04-24 16:05:24
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银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by nklyw at 2010-04-24 18:22:41:
再做之前，一定要测一下模板的OD值，最好稀释成100ng/ul，加0.5-1ul的模板就行了，还有就是程序一定要正确无误。


这是我刚跑的模板，中间是λDNA/Hind3，还有λDNA/Hind3的说明书上写的ng/1μg是什么意思啊，
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20楼2010-04-24 19:18:11
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银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 李忠虎 at 2010-04-25 20:15:09:
我觉得是DNA模板质量不高，或者是反应混合物被污染了

我也觉得是模板质量不好，但老师说可以，挺好的，真不知道是咋回事？
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22楼2010-04-26 16:50:53
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