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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片
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银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片 已有29人参与





为什么我P完后一跑胶就成这种结果，是不是什么加多了，请大家分析分析。我的体系是：双蒸水15.7  ，10XBUFFER   2.5，DNTP  2.0，镁离子2.0，引物各1，酶0.3，模板0.5，总体系是25微升。我用这个体系前两天做出来了，别人用这个体系也出条带了，但第三天做出来就成这结果了。而且以前做出的现在也不出了，我跑胶时百分之2.0的胶，90伏跑50分钟。
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1楼 2010-04-24 10:31:52
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by 李忠虎 at 2010-04-25 20:15:09:
我觉得是DNA模板质量不高，或者是反应混合物被污染了

每次做都是这样，管有没有条带，整个泳道都是白的，不知道啥原因
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23楼2010-04-26 16:51:50
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by 六妖妖 at 2010-04-29 16:00:12:
楼上很多同志都说你的模板质量有问题了。PCR抑制剂过多吧。不知道你是用什么方法提取的。换个提取方式试试会不会有所改变。对提取过程中的试剂配制会不会带入太多的杂质。

我是用CTAB法提的小麦叶片的基因组DNA，还有就是我这是转基因植株
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28楼2010-04-30 15:46:41
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by liyong1981 at 2010-04-29 16:52:45:
PCR有时候很不稳定，我还是建议你换模板，或者跑个梯度，希望对你有所帮助

我总共提了2000多份样品，都检测好几百分了，就出来了56个有目的基因，其他的一P就如前面的图一样，梯度也跑了，结果都是一个样子，还有就是我的阳性对照每次P都会出，就是样品不出。
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30楼2010-04-30 15:52:56
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by Henrylee02 at 2010-04-30 16:39:24:
怀疑凝胶浓度不当！

我用1.0到2.0/100ml(1xTAE)的胶跑的，每次跑完基本都这样，不知道什么原因，别人跑的就不这样啊，郁闷啊
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32楼2010-04-30 19:21:29
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by 最爱花诗雨 at 2010-04-30 10:43:35:

我觉得基因这东西，你对自己的实验是最熟悉的，哪个地方有疏漏，自己应该知道，认真点，再试试吧，总会出来原因的

能具体说说有可能在那个环节出问题了？
谢谢
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33楼2010-04-30 19:26:28
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by 六妖妖 at 2010-05-01 13:47:08:


用酒精再洗几次试试。或者重复一下氯仿－异戊醇抽提除去蛋白质再用酒精洗干净。

我提取完后用50微升的DD水溶解DNA的，还可以在纯化吗/
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35楼2010-05-01 19:04:45
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by chentao3320 at 2010-05-26 10:11:46:

我用别人的引物加我的模板可以扩出带，所以我觉得模板应该没问题
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41楼2010-05-26 12:08:45
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by hhh19870612 at 2010-05-21 22:37:02:
可能是你操作过程出现错误，而这些错误没有办法看出来，一般正确的操作p出来的凝胶是比较平整的，不会像你那有，我觉得你还是重新再做一次的，慢慢做，胶体要充分凝结以后再进行电泳

我每次做的阳性对照都可以出带，也没有拖带，就是样品老出现这种问题，
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42楼2010-05-26 12:10:17
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银虫 (小有名气)
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Originally posted by ulicy at 2010-05-26 17:12:20:
你可以用一些试剂公司的PCR mix，按照说明可能能跑的很好

用的是天跟的MIX，做出来效果是一样的
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50楼2010-05-27 20:40:57
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