【求助/交流】各位虫友帮我分析PCR图片 - 动植物 - 综合其他

把时间都浪费在自己身上吧！

11楼2010-04-24 12:30:20

xpb2005

银虫 (小有名气)

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Originally posted by chuan2388 at 2010-04-24 12:30:20:
问题应该出在模板上，可以先换一个模板试试，算是做个阳性对照，如果正常应该可以扩增出东西的；然后就是对你的实验模板做纯化了。

我也觉得模板有问题，或许是不纯，或许是浓度太高了

12楼2010-04-24 15:18:08

wuzhx96

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我觉得是你的模板出问题了。可能是被污染降解了，建议你跑一下模板

13楼2010-04-24 15:45:56

xpb2005

银虫 (小有名气)

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Originally posted by wuzhx96 at 2010-04-24 15:45:56:
我觉得是你的模板出问题了。可能是被污染降解了，建议你跑一下模板

模板我跑过了，应该没降解。

14楼2010-04-24 15:58:08

xpb2005

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补充下，我的阳性对照可以出带，就是样品不出，模板要纯化的话，该怎么做呢？

15楼2010-04-24 16:05:24

HarveyWang

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Originally posted by xpb2005 at 2010-04-24 11:08:10:

第一张图片是我P出来后用1.2的胶120伏跑的，第二张是我用2. ...

还有一个原因，就是你的电泳胶有问题。
哈哈

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

16楼2010-04-24 17:01:43

HarveyWang

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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-25 21:16

引用回帖:

Originally posted by xpb2005 at 2010-04-24 15:58:08:

模板我跑过了，应该没降解。
[img]img]

样品再加Buffer 后，再电泳一下。
看你的Marker 跑的很好。

赞一下(1人)

【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

17楼2010-04-24 17:03:00

zjzz

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1949stone(金币+2): 2010-04-30 10:25

看你的模板胶图，点样孔里有大量的蛋白残留，而且你说阳性对照能出带。应该是模板的问题。
建议使用苯酚/氯仿抽去除蛋白质，这是非常好用又常用的手段。不过有毒操作请小心。
或者PCR体系加点1%DMSO试试【还是比较建议纯化模板】

赞一下(2人)

终于熬成木虫了……

18楼2010-04-24 17:45:38

nklyw

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1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:25

再做之前，一定要测一下模板的OD值，最好稀释成100ng/ul，加0.5-1ul的模板就行了，还有就是程序一定要正确无误。

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19楼2010-04-24 18:22:41

xpb2005

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Originally posted by nklyw at 2010-04-24 18:22:41:
再做之前，一定要测一下模板的OD值，最好稀释成100ng/ul，加0.5-1ul的模板就行了，还有就是程序一定要正确无误。

这是我刚跑的模板，中间是λDNA/Hind3，还有λDNA/Hind3的说明书上写的ng/1μg是什么意思啊，

20楼2010-04-24 19:18:11