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chuan2388

金虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:25
问题应该出在模板上，可以先换一个模板试试，算是做个阳性对照，如果正常应该可以扩增出东西的；然后就是对你的实验模板做纯化了。
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把时间都浪费在自己身上吧！
11楼2010-04-24 12:30:20
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xpb2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chuan2388 at 2010-04-24 12:30:20:
问题应该出在模板上，可以先换一个模板试试，算是做个阳性对照，如果正常应该可以扩增出东西的；然后就是对你的实验模板做纯化了。

我也觉得模板有问题，或许是不纯，或许是浓度太高了
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12楼2010-04-24 15:18:08
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wuzhx96

铁杆木虫 (著名写手)
我觉得是你的模板出问题了。可能是被污染降解了，建议你跑一下模板
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13楼2010-04-24 15:45:56
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xpb2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wuzhx96 at 2010-04-24 15:45:56:
我觉得是你的模板出问题了。可能是被污染降解了，建议你跑一下模板

模板我跑过了，应该没降解。
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14楼2010-04-24 15:58:08
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xpb2005

银虫 (小有名气)
补充下，我的阳性对照可以出带，就是样品不出，模板要纯化的话，该怎么做呢？
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15楼2010-04-24 16:05:24
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):欢迎发图 2010-04-30 10:25
引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-04-24 11:08:10:





第一张图片是我P出来后用1.2的胶120伏跑的，第二张是我用2. ...

还有一个原因，就是你的电泳胶有问题。
哈哈
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
16楼2010-04-24 17:01:43
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-25 21:16
引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-04-24 15:58:08:

   


模板我跑过了，应该没降解。
[img]img]

样品再加Buffer 后，再电泳一下。
看你的Marker 跑的很好。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
17楼2010-04-24 17:03:00
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-30 10:25
看你的模板胶图，点样孔里有大量的蛋白残留，而且你说阳性对照能出带。应该是模板的问题。
建议使用苯酚/氯仿抽去除蛋白质，这是非常好用又常用的手段。不过有毒操作请小心。
或者PCR体系加点1%DMSO试试【还是比较建议纯化模板】
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终于熬成木虫了……
18楼2010-04-24 17:45:38
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nklyw

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-30 10:25
再做之前，一定要测一下模板的OD值，最好稀释成100ng/ul，加0.5-1ul的模板就行了，还有就是程序一定要正确无误。
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19楼2010-04-24 18:22:41
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xpb2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by nklyw at 2010-04-24 18:22:41:
再做之前，一定要测一下模板的OD值，最好稀释成100ng/ul，加0.5-1ul的模板就行了，还有就是程序一定要正确无误。


这是我刚跑的模板，中间是λDNA/Hind3，还有λDNA/Hind3的说明书上写的ng/1μg是什么意思啊，
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20楼2010-04-24 19:18:11
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