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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pfu直接用于TA克隆？
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695

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】pfu直接用于TA克隆？ 已有3人参与

前段时间，用promega 的pfu直接进行了TA克隆，PCR中并没有加加普通的taq，也没有进行后续的加尾A，直接连接到了pGEMT EASY VECTOR,得到的阳性克隆进行了测序，结果和我的5RACE和3RACE拼接结果都一致，只有1-2个碱基不一致，请问这样的结果可靠吗？就是看大家都说pfu不能直接用于TA克隆。请高手指点

[ Last edited by 695 on 2010-4-23 at 23:29 ]
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1楼 2010-04-23 23:15:32
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2010-04-24 00:03:11:
奇怪，难道这样做也可以，不用加A也能连上？否则就是你的载体有平末端？

恩，是啊，也是奇怪，pGEM T easy 没这个功效吧 载体上的通用引物和特异引物，以及不同组合的酶切都验证了
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-24 02:05:59
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):值得推敲 2010-04-24 00:40
奇怪，难道这样做也可以，不用加A也能连上？否则就是你的载体有平末端？
赞一下(2人) 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
2楼2010-04-24 00:03:11
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yangtao16

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
4楼2014-07-19 13:06:22
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