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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 亲们，关于TA克隆什么的，不是很理解
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JGZYDX

新虫 (小有名气)

[求助] 亲们，关于TA克隆什么的，不是很理解 已有4人参与

亲们，是这样的，老师让我把PCR产物与载体连接，转化，然后提取质粒，再进行后续实验，但是我不太理解为什么这样做，老师解释说什么知道拷贝数什么的，但是还是稀里糊涂的，谁能通俗易懂的解释一下（图中是我在文章上看到的，依旧不理解这是要干啥）…… 谢谢，在线等哈

亲们，关于TA克隆什么的，不是很理解
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1楼 2014-03-14 15:29:45
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
JGZYDX: 金币+5, ★有帮助 2014-03-14 16:35:52
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-15 17:58:22
你后续实验是做原核表达吗？如果是的话，那么这一步应该是在载体上扩增你的目的基因，之后再双酶切目的基因，然后跟表达载体连接
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-03-14 16:19:19
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JGZYDX

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-14 16:19:19
你后续实验是做原核表达吗？如果是的话，那么这一步应该是在载体上扩增你的目的基因，之后再双酶切目的基因，然后跟表达载体连接

不是，好像还是做PCR，唉，稀里糊涂的，我不大明白的是，连接载体转化再提质粒，为什么能知道拷贝数呢？
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3楼2014-03-14 16:34:00
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yangyongjun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
JGZYDX: 金币+5, ★有帮助 2014-03-14 17:24:53
拷贝数，？那你们要做定量pcr喽！

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4楼2014-03-14 16:53:49
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JGZYDX

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yangyongjun at 2014-03-14 16:53:49
拷贝数，？那你们要做定量pcr喽！

估计是吧，但是，为什么产物经过连接转化再提取后，就能知道拷贝数呢？

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5楼2014-03-14 16:56:35
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-16 11:48:47
JGZYDX: 金币+10, ★有帮助, 嗯，确实是研一的，谢谢哈，我再好好琢磨琢磨 2014-03-16 19:55:29
楼主应该是理解错了，是增加拷贝数，如果仅仅是靠PCR产物，量是有限的，而且容易突变，克隆以后，目的片段会随着细菌的增多，而变多，也就是你们老师说的拷贝数变多了，小兄弟是刚本科毕业吧，建议可以看看分子克隆
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6楼2014-03-16 10:37:40
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gshllb

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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JGZYDX: 金币+10, ★有帮助, 谢谢哈，我稀里糊涂的，再努力理解理解吧！ 2014-03-16 19:56:53
拷贝数根据你设定pcr的反应时间就可以算出来啊，肯定复制出大量目标产物之后做相关分析研究。一个循环时间你难道不知道吗

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活出自己
7楼2014-03-16 11:46:28
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