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JGZYDX

新虫 (小有名气)

[求助] 亲们,关于TA克隆什么的,不是很理解已有4人参与

亲们,是这样的,老师让我把PCR产物与载体连接,转化,然后提取质粒,再进行后续实验,但是我不太理解为什么这样做,老师解释说什么知道拷贝数什么的,但是还是稀里糊涂的,谁能通俗易懂的解释一下(图中是我在文章上看到的,依旧不理解这是要干啥)…… 谢谢,在线等哈

亲们,关于TA克隆什么的,不是很理解
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-16 11:48:47
JGZYDX: 金币+10, 有帮助, 嗯,确实是研一的,谢谢哈,我再好好琢磨琢磨 2014-03-16 19:55:29
楼主应该是理解错了,是增加拷贝数,如果仅仅是靠PCR产物,量是有限的,而且容易突变,克隆以后,目的片段会随着细菌的增多,而变多,也就是你们老师说的拷贝数变多了,小兄弟是刚本科毕业吧,建议可以看看分子克隆
6楼2014-03-16 10:37:40
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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JGZYDX: 金币+5, 有帮助 2014-03-14 16:35:52
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-03-15 17:58:22
你后续实验是做原核表达吗?如果是的话,那么这一步应该是在载体上扩增你的目的基因,之后再双酶切目的基因,然后跟表达载体连接
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-03-14 16:19:19
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JGZYDX

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-14 16:19:19
你后续实验是做原核表达吗?如果是的话,那么这一步应该是在载体上扩增你的目的基因,之后再双酶切目的基因,然后跟表达载体连接

不是,好像还是做PCR,唉,稀里糊涂的,我不大明白的是,连接载体转化再提质粒,为什么能知道拷贝数呢?
3楼2014-03-14 16:34:00
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yangyongjun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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JGZYDX: 金币+5, 有帮助 2014-03-14 17:24:53
拷贝数,?那你们要做定量pcr喽!

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-03-14 16:53:49
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