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【求助/交流】pfu直接用于TA克隆?
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木虫
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专业: 植物生理与生化
[交流]
【求助/交流】pfu直接用于TA克隆?
已有3人参与
前段时间,用promega 的pfu直接进行了TA克隆,PCR中并没有加加普通的taq,也没有进行后续的加尾A,直接连接到了pGEMT EASY VECTOR,得到的阳性克隆进行了测序,结果和我的5RACE和3RACE拼接结果都一致,只有1-2个碱基不一致,请问这样的结果可靠吗?就是看大家都说pfu不能直接用于TA克隆。请高手指点
[
Last edited by 695 on 2010-4-23 at 23:29
]
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1楼
2010-04-23 23:15:32
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sutao1979
木虫
(著名写手)
小木虫10年groupleader
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帖子: 1479
在线: 64小时
虫号: 79951
注册: 2005-07-12
性别: GG
专业: 植物分类学
★ ★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):值得推敲 2010-04-24 00:40
奇怪,难道这样做也可以,不用加A也能连上?否则就是你的载体有平末端?
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会当凌绝顶,一览众山小
2楼
2010-04-24 00:03:11
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木虫
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虫号: 347369
注册: 2007-04-16
专业: 植物生理与生化
引用回帖:
Originally posted by
sutao1979
at 2010-04-24 00:03:11:
奇怪,难道这样做也可以,不用加A也能连上?否则就是你的载体有平末端?
恩,是啊,也是奇怪,pGEM T easy 没这个功效吧 载体上的通用引物和特异引物,以及不同组合的酶切都验证了
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3楼
2010-04-24 02:05:59
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yangtao16
禁虫
(初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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4楼
2014-07-19 13:06:22
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