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RT-PCR后的cDNA呢？ 已有5人参与
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今天做真菌RT-PCR合成cDNA第一链，但是却出现下图结果，我的目的RNA应是1000多bp，请做过的虫子帮忙分析下原因。marker是DL2000，最右面是RNA，中间两道分别是用oligo（dT）和随机引物作引物的结果。 [ Last edited by amisking on 2010-5-10 at 18:18 ] |
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2楼2009-08-11 21:37:31
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8楼2009-08-12 07:58:09
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tingl0087(金币+2,VIP+0):谢谢！ 8-12 23:25
tingl0087(金币+2,VIP+0):今天直接RT后做了PCR，可是只有引物二聚体，照你的经验，可能是什么原因呢？再谢谢了！ 8-12 23:32
tingl0087(金币+2,VIP+0):谢谢！ 8-12 23:25
tingl0087(金币+2,VIP+0):今天直接RT后做了PCR，可是只有引物二聚体，照你的经验，可能是什么原因呢？再谢谢了！ 8-12 23:32
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真菌这类真核生物，如果用Trizol提RNA，本来就应该有3条带吧，5.8S， 18 S， 28 S RNA，没有错。 cDNA基本上电泳看不出条带的，就是smear，楼主不用电泳了，直接逆转录，没有问题。cDNA的量本来就少，加上是单链，看不出自己目的条带的。18S，28S RNA 能看到，是因为它的浓度非常大，有比较均一，一样的大小。 |
9楼2009-08-12 11:19:19
10楼2009-08-12 14:51:01
