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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR后的cDNA呢？
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shuaiger

木虫 (正式写手)
楼主只是RT，还没有PCR呢！
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11楼2009-08-12 17:40:41
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guyue2885

银虫 (正式写手)
正常~~~~ＨＨ
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12楼2009-08-12 18:30:08
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★ ★
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tingl0087(金币+1,VIP+0):是自己设计的引物 8-13 10:40
引用回帖:
Originally posted by panacea007 at 2009-8-12 11:19:



真菌这类真核生物，如果用Trizol提RNA，本来就应该有3条带吧，5.8S， 18 S， 28 S RNA，没有错。

cDNA基本上电泳看不出条带的，就是smear，楼主不用电泳了，直接逆转录，没有问题。cDNA的量本来就少，加 ...

1。首先用别人用过没问题的引物来确定是反转录问题还是PCR的问题。我看你的RNA提取质量不错，反转录如果按照protocol来成功率也很高，很有可能是你的引物有问题，你是用内参p的么？
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13楼2009-08-13 03:15:46
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mxb2008

木虫 (著名写手)

我说两句

★
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我认为总RNA还算可以，可以做反转录。我也在做这方面的实验，反转录条带也可以。可做下游实验。关于总RNA我说两句，得到什么样的条带，是两条，还是三条，主要看你沉淀RNA是用的是什么样的沉淀剂，用LiCl得到的就是两条，第三条很淡，有时还看不到，如你用乙醇或异丙醇做沉淀剂得到是三条，第三条还很亮。根据以上分析，我基本可以肯定作者用的乙醇或异丙醇来沉淀的总RNA。
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14楼2010-05-10 13:41:22
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刘仕博

金虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-08-11 22:14:15:
这种情况才是正常的~~~
我现在都不跑cDNA电泳，逆转录之后直接PCR

现在的高手怎么越来越厉害？
不跑电泳咋能知道自己的DNA质量是不是好呢，万一DNA不行，那后面的实验不是都白做了吗？
快告诉我下是咋个事情法，我以后也就不跑了，呵呵~
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生命在于折腾~
15楼2010-05-10 14:01:35
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by panacea007 at 2009-08-12 11:19:19:



真菌这类真核生物，如果用Trizol提RNA，本来就应该有3条带吧，5.8S， 18 S， 28 S RNA，没有错。

cDNA基本上电泳看不出条带的，就是smear，楼主不用电泳了，直接逆转录，没有问题。cDNA的量本来就少，加 ...

正解，三条带是正常滴，电泳是不需要滴，
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16楼2010-05-10 15:13:48
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
正常，因为mRNA的大小就不一样，所以反转录后的cDNA也应该是弥散的
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17楼2010-05-10 18:11:34
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六妖妖

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
反转cDNA的质量要在RNA水平上去控制。总RNA完整性好，抽提的量足够大，反转出的cDNA基本没问题。除非是反转录试剂不行。
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18楼2012-02-15 14:03:45
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