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tingl0087

金虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR后的cDNA呢? 已有5人参与

今天做真菌RT-PCR合成cDNA第一链,但是却出现下图结果,我的目的RNA应是1000多bp,请做过的虫子帮忙分析下原因。marker是DL2000,最右面是RNA,中间两道分别是用oligo(dT)和随机引物作引物的结果。

[ Last edited by amisking on 2010-5-10 at 18:18 ]
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


tingl0087(金币+1,VIP+0):谢谢!恍然大悟~ 8-12 23:19
这样跑胶没有意义,你看到的其实是降解的RNA, EB只能和双链DNA结合,不能和单链cDNA结合。就算结合你也看不到条带,cDNA的大小不等,你想看到多大的呢?
5楼2009-08-11 23:35:25
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


tingl0087(金币+1,VIP+0):那这种情况我应该继续往下做吗? 8-11 22:09
总cDNA本来就是一片smear的……
2楼2009-08-11 21:37:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

这种情况才是正常的~~~
我现在都不跑cDNA电泳,逆转录之后直接PCR
3楼2009-08-11 22:14:15
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pigsunny

铜虫 (小有名气)

我都不跑cDNA电泳,逆转录之后直接PCR
学习成就未来!
4楼2009-08-11 23:21:33
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