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qinbanruo

新虫 (正式写手)

[求助] pcr, 电泳,DNA条带 已有3人参与

pcr后,电泳跑出来的DNA条带很弱,是怎么问题?

pcr, 电泳,DNA条带


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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流水青苔

木虫 (著名写手)

楼主有空的话,可以做下这样的实验吗?假设现在退火温度为55度,①55-5cycle,56-5cycle,57-5cycle,58-5cycle,59-5cycle,60-10cycle。②60-5cycle,59-5cycle,58-5cycle,57-5cycle,56-15cycle。不喜勿喷,纯属个人想知道结果,如有问题望指正。

发自小木虫Android客户端
4楼2017-04-07 23:25:47
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查看全部 11 个回答

stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-04-08 08:39:58
我也出过这样的情况,DNA浓度没问题,PCR后有一半的条带不亮。可能是引物和DNA匹配有些差异,比如说我的引物完全按A种青霉DNA设计的,但是PCR的这个DNA是B种青霉的。
你的这个很正常吧,产物分子量很小。溶胶和跑胶严格按照标准来做会好些。
我是同时把循环数+5,引物量加倍,最后做出的图形很漂亮。
坚持!
2楼2017-04-07 16:23:38
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-08 08:40:14
引物二聚体很亮,建议减少引物、提高退火温度
条带太弱,建议适当增加循环、增加模板量或者降低退火温度
3楼2017-04-07 22:23:28
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luil121

银虫 (小有名气)

如果是跑胶后染色的话可以考虑下配置新的染液

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-04-08 00:22:43
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