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柠檬大虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌DNA提取完，pcr没有结果怎么办，附基因组DNA电泳图

我采用CTAB法提取的真菌DNA，可是电泳图这样可以么，我用真菌通用引物PCR，怎么都P不出来，望高手指教下，看是否我提取的有问题，还是哪里的问题，我上一批也是同样的方法，只是最后的条带没有那么亮，都P得出来。
望高手解释下我的电泳图啊，万分感谢

新图8.jpg
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1楼 2012-12-05 16:04:44
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个基因组提的非常不好，重新提吧
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-12-05 16:16:30
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-12-05 21:36:06
有蛋白等杂志，在胶孔附近，在酚氯仿离心吸取上清时，一定注意不能吸多了，以防吸到中间层等杂质，还有最好用Rnase处理一下
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3楼2012-12-05 16:21:38
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nnnnn1

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
点样有点多，另外杂质有点多。
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4楼2012-12-05 17:32:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品杂质很多。不过一般做PCR也可以用。如果用浓度低的样品可以P出来，原因是不是模板量太大了？
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5楼2012-12-06 09:00:24
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板浓度太高也有可能p不出来哦
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6楼2012-12-06 10:38:16
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柠檬大虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-06 09:00:24
样品杂质很多。不过一般做PCR也可以用。如果用浓度低的样品可以P出来，原因是不是模板量太大了？

我10ul体系，模板只加0.4也，我不知道浓度应该多少才合适？请指教下
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7楼2012-12-06 19:17:22
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柠檬大虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-12-05 16:21:38
有蛋白等杂志，在胶孔附近，在酚氯仿离心吸取上清时，一定注意不能吸多了，以防吸到中间层等杂质，还有最好用Rnase处理一下

我可以现在加 么？ 现在是放在-20度冷藏的，是拿出来解冻后直接加酶就可以了么
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8楼2012-12-06 19:18:16
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柠檬大虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by laokuang1988 at 2012-12-06 10:38:16
模板浓度太高也有可能p不出来哦

模板浓度大概多少是合适的呢？
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9楼2012-12-06 19:18:44
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 柠檬大虫 at 2012-12-06 19:18:16
我可以现在加 么？ 现在是放在-20度冷藏的，是拿出来解冻后直接加酶就可以了么...

现在不加，我估计RNA也降解完了在酚氯仿离心吸取上清时，一定注意不能吸多了，以防吸到中间层的蛋白多糖等等杂质，胶空附近跑不出去的应该是蛋白类，跑在最前面的应该是未降解完得RNA
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10楼2012-12-06 19:54:09
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