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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真菌DNA提取完，pcr没有结果怎么办，附基因组DNA电泳图
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 柠檬大虫 at 2012-12-06 19:17:22
我10ul体系，模板只加0.4也，我不知道浓度应该多少才合适？请指教下...

真核生物基因组DNA模板做PCR大致在100ng左右。如果你的样品中含有较多RNA，定量也难以准确，可以通过你跑胶的亮度和marker对比估计大致浓度。一般提的DNA需要稀释。
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11楼2012-12-07 07:25:44
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-07 16:32:19
可能DNA浓度太大了，我们提的DNA稀释5倍后取2微升作模板，体系是50微升的。10微升体系加0.4微升的DNA也不算少。你可以做了梯度稀释DNA看下，5倍，10倍，20倍，50倍，100倍之类的吧
另外，蛋白、糖、酒精等杂质会影响扩增。RNA的话，普通pcr应该没问题，我是没特意处理过RNA，电泳图上一大片，PCR一样做出来
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12楼2012-12-07 09:21:31
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柠檬大虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-12-06 19:54:09
现在不加，我估计RNA也降解完了在酚氯仿离心吸取上清时，一定注意不能吸多了，以防吸到中间层的蛋白多糖等等杂质，胶空附近跑不出去的应该是蛋白类，跑在最前面的应该是未降解完得RNA...

那我现在应该怎么做呢？就现在已经提好的这些基因组DNA
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13楼2012-12-07 09:45:02
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 柠檬大虫 at 2012-12-07 09:45:02
那我现在应该怎么做呢？就现在已经提好的这些基因组DNA...

最好是重提吧，重提的话，也不是很麻烦啊
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14楼2012-12-07 11:25:07
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的上样量太大了，减少一下上样量，不过你的这个DNA提取的效果真的不怎么好
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15楼2012-12-07 11:58:26
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
虽然提的不好，但是没有理由p不出来，用rna酶处理一下，RNA太多会竞争引物
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16楼2012-12-07 12:53:18
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 柠檬大虫 at 2012-12-06 19:18:44
模板浓度大概多少是合适的呢？...

这个你做个梯度就可以了吧
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17楼2012-12-08 22:49:10
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