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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用试剂盒提土壤总DNA，PCR后仍无条带，求原因及解决方法
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张玉洁想下载

木虫 (初入文坛)

[求助] 用试剂盒提土壤总DNA，PCR后仍无条带，求原因及解决方法

我是用试剂盒FAST DNATM SPIN Kit for Soil提土壤DNA的，严格按照实验步骤操作，然后提出来的进行16S扩增，但是电泳后没有条带，我的实验土壤是添加生物炭的，由于第一次做分子实验，老是没有结果，很是着急，求给位大神支支招，谢谢……
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天行健，君子以自强不息~
1楼2013-11-18 11:35:48
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
do u have a posoitive control?
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2楼2013-11-18 12:10:16
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张玉洁想下载

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-18 12:10:16
do u have a posoitive control?

完全是按照试剂盒步骤来的，我的实验土壤一直是放在零下20度保存的，是一个实验系列的，现在十个土样都没有结果，很着急很着急……
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天行健，君子以自强不息~
3楼2013-11-18 15:55:56
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分子实验说简单也简单，说复杂也复杂。毫不夸张地说，其中的操作对实验是有很重要的作用，不怕费钱的话先多做几次练手吧。一般成品的试剂盒都是试过很多次才上市的。祝好运。
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轻描淡写，浓墨重彩。
4楼2013-11-18 18:43:23
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抹香鲸

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 提取的总DNA测浓度了吗？结果怎样？泡胶了吗？ 条带何如？
2 扩增mixture里，加BSA了吗？
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everything will flow
5楼2013-11-19 20:07:01
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张玉洁想下载

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-11-18 18:43:23
分子实验说简单也简单，说复杂也复杂。毫不夸张地说，其中的操作对实验是有很重要的作用，不怕费钱的话先多做几次练手吧。一般成品的试剂盒都是试过很多次才上市的。祝好运。

就是因为怕费钱，每一步都很小心的在做，结果没有试验结果，应该不是操作问题，因为师姐做的也没有条带……
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天行健，君子以自强不息~
6楼2013-11-21 20:30:09
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张玉洁想下载

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 抹香鲸 at 2013-11-19 20:07:01
1 提取的总DNA测浓度了吗？结果怎样？泡胶了吗？ 条带何如？
2 扩增mixture里，加BSA了吗？

没有测浓度，总DNA没有条带，就16S rRNA全长扩增了，结果还是没有条带，因为是全长扩增，没有加BSA……
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天行健，君子以自强不息~
7楼2013-11-21 20:31:41
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
引用回帖:
6楼: Originally posted by 张玉洁想下载 at 2013-11-21 20:30:09
就是因为怕费钱，每一步都很小心的在做，结果没有试验结果，应该不是操作问题，因为师姐做的也没有条带……...

这个就不好说了，我看师兄今天也没有条带，就重做了。多试试吧。
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轻描淡写，浓墨重彩。
8楼2013-11-21 20:32:37
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抹香鲸

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张玉洁想下载 at 2013-11-21 20:31:41
没有测浓度，总DNA没有条带，就16S rRNA全长扩增了，结果还是没有条带，因为是全长扩增，没有加BSA……...

加点儿BSA，土壤里面有些成分是taq酶抑制剂。
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everything will flow
9楼2013-11-22 04:21:08
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Love蕾醒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 抹香鲸 at 2013-11-19 20:07:01
1 提取的总DNA测浓度了吗？结果怎样？泡胶了吗？ 条带何如？
2 扩增mixture里，加BSA了吗？

请问一下BSA浓度和添加量是多少？感谢！
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10楼2019-09-19 11:24:15
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